Agar cetrymid lub cetrimid jest selektywnym pożywce stałej przeznaczone do izolacji z Pseudomonas aeruginosa. Opiera się na pokazaniu produkcji charakterystycznych dla tego gatunku barwników i powstał z modyfikacji agaru Tech, stworzonego przez King, Ward i Raney.
Oryginalna formuła zawierała sole chlorku magnezu, siarczanu potasu, trzustkowe trawienie żelatyny oraz agar-agar. Modyfikacja receptury polegała na dodaniu cetrymidu (bromku cetylotrimetyloamoniowego) i glicerolu.
Agar cetrymidowy wysiany Pseudomonas aeruginosa Źródło: BiotechMichael, z Wikimedia Commons
Agar cetrimidowy jest przydatny do badań mikrobiologicznych próbek, w przypadku których podejrzewa się obecność Pseudomonas aeruginosa. Należy zauważyć, że ta bakteria jest niezwykle ważna, ponieważ chociaż jest częścią normalnej mikrobioty środowiskowej, często zachowuje się jak oportunistyczny patogen.
Z tego powodu jednym z najczęstszych problemów wywoływanych przez ten zarazek są zakażenia szpitalne, czyli te, które występują w środowisku szpitalnym, atakując pacjentów z osłabionym układem odpornościowym.
Z drugiej strony, ze względu na powinowactwo tego mikroorganizmu do wilgoci, najbardziej wrażliwymi celami skażenia są: sprzęt do wspomaganego oddychania, leki, nebulizatory, źródła wody, klimatyzatory, środki dezynfekujące, roztwory mydła, roztwory do iniekcji, otwarte rany , cewniki, rurki moczowe, m.in.
W tym sensie agar cetrymidowy jest przydatny do przeprowadzania kontroli mikrobiologicznych i hodowli wspomnianych wcześniej elementów.
Podstawa
Agar Cetrimide opiera się na zdolności podłoża do promowania wzrostu P. aeruginosa, stymulowania produkcji jego pigmentów, a tym samym hamowania wzrostu innych mikroorganizmów.
Właściwości te wynikają z funkcji każdego z jego składników. Obecny pepton żelatyny służy jako źródło azotu, witamin i minerałów. Glicerol lub gliceryna działa jako źródło węgla.
Z kolei cetrymid (bromek cetylotrimetyloamoniowy) jest substancją hamującą rozwój bakterii innych niż P. aeruginosa, w tym innych gatunków należących do tego samego rodzaju.
Hamowanie występuje, ponieważ cetramid działa jako detergent kationowy, powodując destabilizację błony plazmatycznej większości bakterii, z wyjątkiem P. aeruginosa i niektórych innych, którym udaje się przeżyć.
Z drugiej strony zawiera chlorek magnezu i siarczan potasu. Związki te stymulują ekspresję fenotypową związaną ze zdolnością Pseudomonas aeruginosa do wytwarzania różnych pigmentów, w tym: piocyjaniny, pyowerdyny, pyorrubiny, pyomelaniny i fluoresceiny. Wreszcie zawiera agar-agar, który nadaje mu stałą konsystencję.
Interpretacja
Interpretację wzrostu uzyskanego w tym agarze przeprowadza się w następujący sposób:
Przypuszczalnym wynikiem obecności tej bakterii we wspomnianej próbce jest obserwacja okrągłych, gładkich kolonii o regularnych krawędziach, z produkcją niebiesko-zielonkawych, zielonych, brązowych lub czerwonawych pigmentów, a także wydzielaniem owocowego zapachu (aminoacetofenonu).
Z drugiej strony, obserwacja jasnozielono-żółtego pigmentu na koloniach wskazuje na P. aeruginosa, gdy płytka jest wystawiona na działanie światła ultrafioletowego.
Fluorescencja kolonii P. aeruginosa na agarze cetrymidowym w świetle ultrafioletowym.
Należy zauważyć, że każdy obserwowany kolor wynika z produkcji określonego pigmentu. Pigment niebiesko-zielony odpowiada wytwarzaniu piocyjaniny, zielony pyoverdin, czerwonawy piorubiny, brązowy pyomelaniny, a jasnożółto-zielony fluorescencji w świetle UV fluoresceiny.
Przygotowanie
Odważyć 43 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w wodzie destylowanej. Dodaj 10 ml glicerolu. Przenieś mieszaninę do źródła ciepła. Gotuj przez kilka minut, aż do całkowitego rozpuszczenia.
Autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut. Odstawić i podawać na sterylnych szalkach Petriego, gdy temperatura wynosi około 50 ° C.
Pozostawić do zestalenia, odwrócić, uporządkować w płytkach i przechowywać w lodówce do momentu użycia. Płytki z agarem cetrimidowym należy wyjąć z lodówki przed wysiewem i pozostawić do osiągnięcia temperatury pokojowej.
Końcowe pH pożywki powinno wynosić 7,2 ± 0,2.
Odwodnione podłoże ma kolor beżowy, a preparat matowobiały.
Aplikacje
Wszystkie rodzaje próbek, w których podejrzewa się obecność Pseudomonas aeruginosa, można wysiewać na agarze cetrymidowym. Dlatego jest przydatny we wszystkich obszarach mikrobiologii (środowiskowa, przemysłowa, kliniczna, woda i żywność).
Bardzo ważna jest analiza środowiska szpitalnego, a tym samym możliwość zastosowania środków naprawczych, ponieważ mikroorganizm ten dociera do pacjentów za pośrednictwem skażonego sprzętu, leków, roztworów i materiałów eksploatacyjnych, z których korzysta pacjent.
W ten sposób mikroorganizm może zakażać dolne drogi oddechowe, drogi moczowe i rany pacjentów z obniżoną odpornością.
Liczbę kolonii P. aeruginosa można również przeprowadzić w testach granicznych drobnoustrojów.
Posiany
Jako kulturę podstawową można zastosować agar cetrimidowy. Płytkę zaszczepia się na jednej z jej krawędzi, a stamtąd jest rozprowadzana przez wyczerpanie na pozostałą część płytki. Płynne próbki można wysiewać na powierzchnię szpatułką drigalskiego.
Płytki inkubuje się w warunkach tlenowych w 37 ° C przez 24 godziny inkubacji.
Ograniczenia
-Niewielki procent szczepów Pseudomonas aeruginosas nie wytwarza piocyjaniny, więc można zinterpretować fałszywie ujemny wynik.
-Niektóre gatunki Pseudomonas o znaczeniu klinicznym są hamowane w tym podłożu.
-Mimo obserwowania charakterystyk opisanych dla Pseudomonas aeruginosa, muszą one zostać potwierdzone dodatkowymi testami identyfikacyjnymi. Test, którego nie można pominąć, to test oksydazy, musi dać wynik pozytywny.
-Niektóre Enterobacteriaceae mogą rosnąć w tym podłożu i wytwarzać żółty pigment, ale różni się on od Pseudomonas aeruginosa tym, że gdy płytka jest poddana działaniu światła ultrafioletowego, nie ma fluorescencji.
- Serratia marcescens rozwija się i wytwarza różowy pigment.
-Jeśli płytki wysiane agarem cetrimidowym są eksponowane na jakiś czas w temperaturze pokojowej, szczepy P. aeruginosa mogą stracić fluorescencję obserwowaną w świetle ultrafioletowym, jednak właściwość odzyskuje się, jeśli są ponownie inkubowane w 37 ° C.
QA
Do analizy dobrego działania agaru cetrimidowego można użyć szczepów kontrolnych, takich jak: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Oczekiwane rezultaty to:
- Dobry wzrost dla P. aeruginosa, z niebiesko-zielonym pigmentem i dodatnią fluoresceiną.
- S. maltophilia i S. aureus będą częściowo lub całkowicie zahamowane.
- Oczekuje się, że Escherichia coli zostanie całkowicie zahamowana.
Bibliografia
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypowa i serologiczna charakterystyka izolatów klinicznych Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Baza agarowa cetrimidowa. 2014 Dostępne pod adresem: condalab.com
- Britannia Laboratories. Agar cetrymidowy. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
- BD Laboratories. Agar BD Pseudosel (agar Cetrimide). 2013 Dostępne na: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimide agar. 2009. Dostępne pod adresem: http://f-soria.es