BULION EC: PODKŁAD, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Bulion WE lub bulion Escherichia coli jest selektywnym podłoże do hodowli płynnych. Ta pożywka jest zalecana przez metody standardowe do zliczania bakterii coli ogółem i bakterii coli w kale, metodą najbardziej prawdopodobnej liczby (MPN) w próbkach wody i żywności, gdzie głównym czynnikiem jest Escherichia coli.

Bulion EC składa się z tripteiny, laktozy, soli żółciowych, fosforanu dwupotasowego, fosforanu jednopotasowego, chlorku sodu i wody. Jego formuła jest strategicznie opracowana, aby sprzyjać wzrostowi bakterii z grupy coli ogółem i kałowych oraz zapobiegać rozwojowi innych towarzyszących mikroorganizmów.

Graficzne przedstawienie przygotowania bulionu EC. Źródło: Pixabay.com

Bakteria Escherichia coli jest głównym bakteriem z grupy coli występującym w kale, występującym jako zanieczyszczenie w źródłach wody i pożywienia, będąc przyczyną ważnych zaburzeń żołądkowo-jelitowych.

Należy zauważyć, że istnieje wiele serotypów Escherchia coli; Wśród nich można wymienić enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) i enteroaggregative (EAEC).

To medium pozwala na rozwój wszystkich z nich, ale bez możliwości ich odróżnienia. Wymaga to dodatkowych testów.

Badanie mikrobiologiczne wody i żywności według najbardziej prawdopodobnej liczby (MPN) w celu wyszukania bakterii z grupy coli ogółem i kałowych jest protokołem składającym się z kilku faz; faza przypuszczalna, faza potwierdzająca i faza zakończenia. Bulion EC jest używany w fazie potwierdzającej.

Podstawa

Bulion EC

Pożywka EC opiera się na dostarczaniu składników odżywczych niezbędnych do optymalnego rozwoju bakterii coli ogółem i kałowych, w tym bakterii Escherichia coli.

Te składniki odżywcze dostarcza tripteina, będąca doskonałym źródłem peptydów i aminokwasów. Ponadto zawiera laktozę, ulegający fermentacji węglowodan, który dostarcza energii i pozwala wykazać, czy bakterie wytwarzają gaz.

Z drugiej strony, podłoże zawiera sole żółciowe, które zapewniają selektywny charakter, ponieważ hamują wzrost mikroorganizmów Gram-dodatnich, które mogą być obecne w próbce.

Podobnie fosforan dipotasowy i fosforan monopotasowy działają jako układy równoważące pH. Ten system jest konieczny, ponieważ laktoza zawarta w bulionie ma tendencję do zakwaszania pożywki podczas fermentacji przez mikroorganizmy, ale jest to kompensowane przez sole fosforanowe.

Dlatego pierwiastki te są niezbędne, gdyż niekontrolowana kwasowość może wpływać na prawidłowy rozwój poszukiwanych mikroorganizmów.

Ze swojej strony chlorek sodu stabilizuje środowisko osmotycznie, podczas gdy woda jest rozpuszczalnikiem dla obecnych substancji rozpuszczonych i zapewnia ciekłą konsystencję medium.

Pożywka EC modyfikowana nowobiocyną

Okrend i Rose stworzyli różnorodny bulion EC, zwany bulionem EC modyfikowanym nowobiocyną. Modyfikacja polegała na zmniejszeniu stężenia soli żółciowych i dodaniu 20 mg / dl nowobiocyny.

Ta modyfikacja sprzyja regeneracji szczepów Escherichia coli wywołujących krwotok jelitowy (O157: H7).

Ten serotyp bakteryjny powoduje ciężkie krwotoczne zapalenie jelita grubego, które może prowadzić do zespołu hemolityczno-mocznicowego (HUS); co z kolei może powodować ostrą niewydolność nerek, z wysoką śmiertelnością, która może sięgać nawet 50% u osób starszych.

Ze względu na roczną zachorowalność i śmiertelność powodowaną przez tę bakterię w wyniku spożycia skażonej żywności, Departament Rolnictwa Stanów Zjednoczonych (USDA) zdecydowanie zaleca stosowanie tego podłoża.

Przygotowanie

Bulion EC

Odważyć 37,4 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Mieszaninę należy odstawić na 5 minut. Następnie w źródle ciepła kończy się rozpuszczanie przez częste mieszanie.

Po rozpuszczeniu jest rozprowadzany do wstępnie przygotowanych probówek z probówką Durhama w środku. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

PH pożywki powinno wynosić 6,9 ± 0,2. Odwodnione podłoże ma kolor beżowy, a przygotowane podłoże jest jasno bursztynowe.

Buliony trzymamy w lodówce do momentu użycia. W momencie użycia buliony muszą mieć temperaturę pokojową.

Z drugiej strony bulion EC można również przygotować w podwójnym stężeniu.

Pożywka EC modyfikowana nowobiocyną

Odważyć 36,7 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody. Pozostała część przygotowania jest taka sama, jak opisano powyżej.

Posługiwać się

Analiza bakterii coli ogółem i kału

Bulion EC jest idealny do potwierdzającej fazy badań bakterii z grupy coli metodą NMP, zarówno w próbkach wody, jak również w produktach farmaceutycznych i żywności.

Mętne buliony laktozowe wytwarzające gaz, otrzymane w fazie przypuszczalnej, należy ponownie wysiewać w 2% żółciowo jasnozielonych bulionach i bulionie EC.

W przypadku wszystkich bakterii z grupy coli buliony EC inkubuje się w warunkach tlenowych przez 24 do 48 godzin w temperaturze 37 ° C, aw przypadku bakterii z grupy coli w kale inkubuje się je w warunkach tlenowych przez 24 do 48 godzin w temperaturze 44 ° C.

W obu przypadkach jest to interpretowane w następujący sposób: mętne rury z wytwarzaniem gazu są uważane za pozytywne. Jeśli nie ma produkcji gazu w ciągu 24 godzin, inkubacja trwa do 48 godzin.

Buliony EC-dodatnie przechodzą do pełnej fazy potwierdzającej, która polega na ponownym wysiewie na selektywne podłoża, takie jak agar Mac Conkey, agar EMB lub agar Endo.

Jeśli używanym bulionem jest EC modyfikowana nowobiocyną, zaleca się ponowne posiew probówek z wynikiem dodatnim na agarze Mac Conkey z sorbitolem.

QA

Każda partia przygotowanego podłoża musi być poddana kontroli jakości. Najpierw należy ocenić jałowość podłoża. W tym sensie jeden lub dwa buliony są inkubowane bez inokulacji w aerobiozie przez 24 godziny w 37 ° C. Oczekiwanym rezultatem jest przezroczysty bulion, bez zmętnienia i zmiany koloru.

Po drugie, należy ocenić wzrost znanych szczepów, w tym celu można zastosować następujące bakterie: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego rozwoju drobnoustrojów, obserwując mętny bulion z wytwarzaniem gazu dla E. coli i bez gazu dla Salmonelli.

Inne szczepy, które można włączyć do kontroli to: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Szczepy te muszą być całkowicie zahamowane.

zalecenia

-Umieszczenie probówek Durham ma zasadnicze znaczenie dla badania bakterii z grupy coli.

- Rozprowadzić pożywkę w probówkach przed sterylizacją, nigdy po.

-Nie używaj, jeśli podłoże ma więcej niż 3 miesiące.

-Nie używać, jeśli zaobserwuje się jakąkolwiek zmianę w typowych właściwościach pożywki.

Bibliografia

1. Britannia Laboratories. Medium EC. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
2. Enterohemorrhagic E. coli. Centrum bezpieczeństwa żywnościowego i zdrowia publicznego. 2010 Dostępne pod adresem: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Pożywka EC. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Pożywka EC modyfikowana nowobiocyną. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. z Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Dostępne pod adresem: www.scielo.org.