BULION LAKTOZOWY: PODKŁAD, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Bulion laktoza jest środkiem dla - selektywnej pożywce hodowlanej ciecz stosowana głównie do wstępnego wzbogacenia wyizolowania szczepów Salmonella z analizy mikrobiologicznej przetworzonej żywności, produkty mleczne lub wody. Jest to zalecane przez Międzynarodową Komisję Specyfikacji Mikrobiologicznych dla Żywności (ICMPF).

Pożywka zawiera enzymatyczny rozkład żelatyny, ekstraktu mięsnego i laktozy, substancji niezbędnych do rozwoju bakterii. Ponadto laktoza jest węglowodanem ulegającym fermentacji, dlatego niektóre bakterie z grupy coli są w stanie rozłożyć ją wraz z produkcją gazu.

Buliony mleczanowe z mętnością. Źródło: Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa gil

Z tego powodu bulion laktozowy jest zalecany przez Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) do wstępnych badań bakterii z grupy coli całkowitej i kałowej, kwalifikując go jako doskonałą alternatywę dla substytutu bulionu tryptozowego z siarczanem laurylu w standardowej technice najbardziej prawdopodobnej liczby (MPN). ), wykorzystywane do analizy mikrobiologicznej próbek żywności, mleka i wód powierzchniowych, podziemnych, rekreacyjnych, bytowych i przemysłowych.

Podstawa

W przypadku analizy mikrobiologicznej niektórych próbek etap wstępnego wzbogacania jest niezbędny, aby móc odzyskać określony mikroorganizm, który może występować w bardzo małej ilości lub w niekorzystnych warunkach, które naruszają lub minimalizują jego żywotność.

Tak jest w przypadku żywności suszonej i przetworzonej, prawdopodobnie skażonej Salmonellas sp. W takich przypadkach, jeśli bakterie są obecne, ucierpiały one fizycznie i chemicznie podczas procesu wytwarzania produktu.

W taki sposób, aby mikroorganizmy były narażone na niekorzystne czynniki, takie jak odwodnienie, ekspozycja na produkty hamujące lub toksyczne, a także nakładanie się spowodowane obecnością innych bakterii w większej ilości.

W tym sensie bulion laktozowy działa naprawczo na uszkodzone struktury drobnoustroju, powodując jego regenerację i rozmnażanie w taki sposób, że można go wykryć.

Podobnie bulion laktozowy ma zdolność rozcieńczania substancji hamujących, które mogą wpływać na jego żywotność, umożliwiając jego rozwój. Ponadto skład odżywczy bulionu laktozowego ma kluczowe znaczenie dla sprzyjania wzrostowi Salmonella sp w porównaniu z innymi mikroorganizmami.

W celu ostatecznej identyfikacji należy ją wyhodować na innej ostatecznej pożywce hodowlanej.

Z drugiej strony skład podłoża umożliwia również wykrycie mikroorganizmów fermentujących laktozę, które wytwarzają gaz.

Przygotowanie

Aby przygotować litr bulionu laktozowego, należy odważyć 13 gramów odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1000 ml wody destylowanej.

Aby pomóc w rozpuszczeniu medium w wodzie, roztwór można trochę podgrzać, ale nie za dużo.

Po uzyskaniu jednorodności roztwór przygotowuje się w następujący sposób: jeśli bulion ma być używany do poszukiwania bakterii z grupy coli, przygotowuje się stojak z probówkami, do którego wkłada się do góry dnem probówkę fermentacyjną Durham.

Rurka Durham to bardzo ważny szczegół, ponieważ pozwoli na wykrycie tworzenia się gazów, danych o dużej wartości w poszukiwaniu bakterii z grupy coli.

Gdy probówki są gotowe, należy do nich wlać 10 ml bulionu laktozowego, ilość, która musi być wystarczająca do pokrycia całej probówki Durham.

Jeśli bulion laktozowy ma być używany jako bulion do wstępnego wzbogacania, nie jest konieczne umieszczanie probówki fermentacyjnej Durham. W takim przypadku wymagana jest większa ilość pożywki (225 ml), która będzie podawana w butelkach o pojemności 500 ml, z szerokim otworem i zakrętką odporną na ciepło.

Następnie probówki lub kolby autoklawuje się w 121 ° C przez 15 minut.

Pożywka musi mieć końcowe pH 6,9 ± 0,2 w 25 ° C.

Buliony trzymamy w lodówce do momentu użycia.

Przed użyciem buliony należy doprowadzić do temperatury pokojowej.

Z drugiej strony bulion laktozowy można również przygotować w podwójnym stężeniu.

Niektóre laboratoria dodają purpurę bromokrezolową do bulionu laktozowego jako wskaźnik pH, aby pokazać probówki, w których laktoza została sfermentowana z powodu zmiany koloru. W tym przypadku bulion nabiera fioletowego koloru, a podczas fermentacji zmienia kolor na żółty.

Aplikacje

W laboratoriach mikrobiologicznych bulion laktozowy jest szeroko stosowany, ponieważ jest stosunkowo niedrogim podłożem, które zapewnia wiarygodne i szybkie wyniki (24-48 godzin).

Może być stosowany do analizy całkowitej i kałowej bakterii z grupy coli w pożywieniu i wodzie lub jako bulion do wstępnego wzbogacania Salmonelli.

Wzbogacanie wstępne

Wzbogacanie wstępne jest krokiem poprzedzającym wzbogacenie próbki, co znacznie poprawia odzyskiwanie bakterii z rodzaju Salmonella w przetworzonej żywności.

Aby to zrobić, stałą próbkę pokarmu (25 gramów) lub płyn (25 ml) wysiewa się w 225 ml bulionu laktozowego, inkubując przez 24 do 48 godzin. Następnie zostanie poddany subhodowli we wzbogaconej pożywce, takiej jak bulion seleninowo-cystynowy lub bulion tetrationianowy. Następnie przejdź do nośników selektywnych XLD i SS.

Analiza bakterii coli ogółem i kału

Jest doskonałym pożywką jako wskaźnik zanieczyszczenia kałem.

Z tego powodu bulion laktozowy jest idealny do wstępnej fazy badania bakterii z grupy coli metodą najbardziej prawdopodobnej liczby.

W przypadku próbek, w których podejrzewa się dużą ilość bakterii z grupy coli, zaszczepiona zostanie mniejsza ich ilość (1 ml), natomiast w przypadku próbek, w których podejrzewa się mniejszą liczbę bakterii z grupy coli, zaszczepiona zostanie większa objętość próbek (10 ml).

Do analizy wykonuje się rozcieńczenia ^10-1 , ^10-2 , ^10-3 , tworząc zestaw 3-5 probówek dla każdego użytego stężenia.

Z każdego rozcieńczenia taką samą objętość wysiewa się do bulionów laktozowych.

Probówki są inkubowane przez 24 godziny. Buliony z wynikiem ujemnym inkubuje się przez kolejne 24 godziny.

Interpretacji wyników dokonuje się, obserwując dwie cechy: pierwszą jest obecność lub brak zmętnienia, a ponieważ pożywka ta nie zawiera wskaźnika pH, nie będzie zmiany koloru.

Drugi to produkcja lub brak gazu. Obecność gazu w rurce Durhama jest łatwo rozpoznawalna po pojawieniu się w niej jednego lub więcej pęcherzyków powietrza.

Uznaje się za pozytywne, jeśli obserwuje się obie cechy, to znaczy zmętnienie przy wytwarzaniu gazu. Probówki z wynikiem dodatnim należy ponownie wysiać w pożywce potwierdzającej (2% bulion z zieloną brylantowo żółcią i bulion EC).

Kontrola jakości medium

- Podczas przygotowywania pożywki ważne jest, aby nie zapomnieć o umieszczeniu probówek Durhamsa, jeśli ma to na celu badanie bakterii z grupy coli.

- Nie przegrzewać podłoża przed sterylizacją.

- Rozprowadzać w probówkach przed sterylizacją, nigdy po.

- Nie stosować, jeśli podłoże ma więcej niż 3 miesiące.

- Nie używać, jeśli zauważysz jakąkolwiek zmianę w zwykłych właściwościach medium.

- Przygotowując partię bulionu laktozowego, należy sprawdzić jego jakość, wysiewając znane szczepy, takie jak Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii i Klebsiella pneumoniae. Rosną bardzo dobrze, przy produkcji gazu (kontrola pozytywna).

- Może również zawierać Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium lub Enterococcus faecalis, które rosną dobrze, ale nie wytwarzają gazów (kontrola ujemna).

- Należy zwrócić uwagę, że pierwotnym kolorem odwodnionego podłoża jest beż, a przygotowanego podłoża bardzo jasny i przezroczysty żółty. Jeśli zaobserwuje się zmianę koloru lub wyglądu, może się pogorszyć.

Bibliografia

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologia środowiska i mikrobiologia. (2013) wydanie 1. University of Cartagenas, Kolumbia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. (2009). Techniki analizy mikrobiologicznej żywności. 2nd ed. Wydział Chemii UNAM. Meksyk.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Podwójne stężenie bulionu laktozowego (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Porównanie technik ekstrakcji bakterii grupy coli z osadu jeziora Xochimilco w Meksyku. Rev. Argent. microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Dostępne pod adresem: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Mem. Inst. Investig. Nauka. Zdrowie 2013; 11 (1): 5-14. Dostępne z: scielo.iics.