BULION SOJOWY TRYPTICASEIN: PODKŁAD, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Bulionu tryptonowo-sojowego jest podłoże do hodowli płynnych, bogate w składniki odżywcze, nieselektywne. Ze względu na swoją dużą wszechstronność jest jednym z najczęściej stosowanych płynnych pożywek hodowlanych w laboratorium mikrobiologicznym.

Znany jest również pod nazwą bulionu tryptonowo-sojowego lub strawionej kazeinowo-sojowej, której skrótem jest TSB dla akronimu w języku angielskim Tryptic Soy Broth lub CST dla jego akronimu w języku hiszpańskim. Jego zastosowania są bardzo zróżnicowane ze względu na swój skład. Składa się z tripteiny, peptonu sojowego, chlorku sodu, fosforanu dipotasu i glukozy.

Bulion sojowy z tryptykazą wysiano szczepem Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, w którym obserwuje się wytwarzanie pigmentu. Źródło: Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa Gil.

Jest zdolny do rozmnażania ważnych klinicznie bakterii chorobotwórczych, w tym bakterii wymagających pokarmu i bakterii beztlenowych. W tym środowisku mogą również rozwinąć się niektóre oportunistyczne i zanieczyszczające grzyby.

Ze względu na wysoką wartość odżywczą ma wysoką czułość w wykrywaniu skażenia mikrobiologicznego, dlatego został wybrany przez Służbę Inspekcji Zdrowia Zwierząt i Roślin USDA do analizy mikrobiologicznej szczepionek.

Podobnie bulion sojowy z tryptykazą spełnia wymagania różnych farmakopei (europejskiej EP, japońskiej Japonii i północnoamerykańskiej USP) do badań mikrobiologicznych produktów na poziomie przemysłowym, takich jak kosmetyki i żywność.

Z drugiej strony warto wspomnieć, że pomimo swojej dużej użyteczności podłoże to jest stosunkowo niedrogie, dzięki czemu jest dostępne dla większości laboratoriów mikrobiologicznych. Jest również bardzo łatwy w przygotowaniu.

Podstawa

Tripteina, pepton i glukoza zapewniają jej niezbędne właściwości odżywcze, dzięki czemu jest idealnym podłożem do szybkiego wzrostu drobnoustrojów.

Po około 6-8 godzinach inkubacji wzrost można już zauważyć u większości mikroorganizmów. Istnieją jednak odmiany wolno rosnące, których wzrost może zająć kilka dni.

Chlorek sodu i fosforan dipotasowy działają odpowiednio jako równowaga osmotyczna i regulator pH. O występowaniu wzrostu świadczy pojawienie się zmętnienia w pożywce; jeśli nie ma wzrostu, pożywka pozostaje przezroczysta.

Ze względu na jasną barwę można zaobserwować produkcję pigmentów, tak jak na zdjęciu na początku artykułu, co odpowiada pigmentowi wytwarzanemu przez Pseudomonas aeruginosa.

Przygotowanie

- Bulion sojowy Triptysein

Aby przygotować bulion tryptozowo-sojowy, należy odważyć 30 g odwodnionej komercyjnej pożywki na wadze cyfrowej. Następnie rozpuszcza się w litrze wody destylowanej zawartej w kolbie.

Mieszaninę pozostawia się na 5 minut, a następnie przenosi do źródła ciepła, aby pomóc w rozpuszczeniu pożywki. Należy często mieszać, gotując przez 1 minutę.

Po rozpuszczeniu rozdziela się do probówek o odpowiedniej wielkości, w zależności od potrzeb. Można używać probówek z bawełnianymi zatyczkami lub z nasadkami z bakelitu. Następnie probówki sterylizuje się pożywką w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

PH pożywki musi pozostać na poziomie 7,3 ± 0,2

Należy zauważyć, że odwodniona pożywka hodowlana jest koloru jasnobeżowego i powinna być przechowywana w temperaturze od 10 do 35 ° C w suchym miejscu. Przygotowany bulion ma jasnobursztynowy kolor i należy go przechowywać w lodówce (2 do 8 ° C).

- Warianty bulionu sojowego tryptykazyny

Zmodyfikowany bulion sojowy tryptykazyny można przygotować przez dodanie soli żółciowych i nowobiocyny, aby był selektywny w izolacji E. coli. Inną opcją w tym samym celu jest przygotowanie bulionu tryptykazowo-sojowego uzupełnionego wankomycyną, cefiksymem i tellurynem (2,5 µg / ml).

Z drugiej strony, więcej glukozy (0,25%) można dodać do bulionu trypsynowo-sojowego, jeśli celem jest stymulowanie tworzenia się biofilmów.

Posługiwać się

Jest wystarczająco pożywny, aby umożliwić rozwój wybrednych lub wybrednych bakterii, takich jak Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp i Brucella sp, bez konieczności uzupełniania ich krwią lub surowicą.

Podobnie, w bulionie tym mogą rozwijać się niektóre grzyby, takie jak Candida albicans Complex, Aspergillus sp i Histoplasma capsulatum.

Ponadto pożywka ta w warunkach beztlenowych jest idealna do odzyskiwania bakterii z rodzaju Clostridium, jak również niezarodnikujących bakterii beztlenowych o znaczeniu klinicznym.

Jeśli doda się 6,5% chlorek sodu, może być stosowany do wzrostu Enterococcus i innych Streptococcus grupy D.

Na poziomie badawczym okazał się bardzo przydatny w różnych protokołach, zwłaszcza w badaniu biofilmu lub bakterii tworzących biofilm. Służy również do przygotowania 0,5% zawiesiny bakterii Mac Farland niezbędnych do wykonania antybiogramu metodą Kirby'ego i Bauera.

W tym przypadku pobiera się od 3 do 5 kolonii o podobnym wyglądzie i emulguje w 4-5 ml bulionu sojowego tryptykazyny. Następnie inkubuje się przez 2 do 6 godzin w temperaturze 35-37 ° C, a następnie doprowadza do żądanego stężenia za pomocą sterylnej solanki. Bulionów sojowych z tryptykazą nie należy używać od 18 do 24 godzin inkubacji.

Posiany

Próbkę można wysiewać bezpośrednio lub subhodowlę czystych kolonii pobranych z pożywek selekcyjnych. Inokulum powinno być małe, aby nie zmętnić podłoża przed inkubacją.

Zwykle inkubuje się go w temperaturze 37 ° C w warunkach tlenowych przez 24 godziny, ale warunki te mogą się różnić w zależności od poszukiwanego mikroorganizmu. W razie potrzeby można go również inkubować w warunkach beztlenowych w temperaturze 37 ° C przez kilka dni. Na przykład szybko rosnące lub wybredne mikroorganizmy można inkubować do 7 dni.

W analizie mikrobiologicznej substancji farmaceutycznych - takich jak szczepionki - protokoły są bardziej rygorystyczne. W takich przypadkach bulion bez wzrostu nie jest wyrzucany, dopóki nie osiągnie 14 dni ciągłej inkubacji.

QA

Z każdej przygotowanej partii 1 lub 2 niezaszczepione probówki należy inkubować w celu wykazania ich sterylności. Musi pozostać niezmieniona.

Można również posadzić znane szczepy, aby ocenić ich zachowanie. Wśród szczepów, które można zastosować, są:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 lub 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCCas28CC 305, Cc.

We wszystkich przypadkach wzrost musi być zadowalający w odpowiednich warunkach atmosferycznych i temperaturowych dla każdego mikroorganizmu.

Ograniczenia

-Fermentacja glukozy powoduje obniżenie pH pożywki w wyniku produkcji kwasów. Może to być niekorzystne dla przeżycia niektórych mikroorganizmów wrażliwych na kwasowość.

-Nie jest zalecany do utrzymania szczepów, ponieważ oprócz zakwaszenia bakterie po kilku dniach wyczerpują składniki odżywcze, co w konsekwencji powoduje gromadzenie się toksycznych substancji, które czynią środowisko niegościnnym.

-Należy dbać o wszystkie protokoły dotyczące sterylności, ponieważ buliony są łatwo zanieczyszczone.

-Po przygotowaniu bulionów z tryptykazyną sojową nie należy próbować przenosić bulionu do innej sterylnej probówki, gdyż tego typu manewry są bardzo podatne na skażenie.

Bibliografia

1. Cona E. Warunki dobrego badania wrażliwości za pomocą testu dyfuzyjnego na agarze. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77–81. Dostępne pod adresem: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Bulion sojowy Triptein. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
3. Laboratorium MCD. Bulion sojowy Trypticasein. Dostępne pod adresem: electronic-systems.com
4. Neogen Laboratory. Tryptyk Bulion sojowy. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L.Ocena techniki magnetycznej immunoseparacji do odzyskiwania Escherichia coli O157: H7 w kremach mlecznych. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Dostępne pod adresem: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Tworzenie biofilmu w izolatach Staphylococcus aureus według wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe i pochodzenia klinicznego. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Dostępne pod adresem: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T.Iolation of Escherichia coli O157: H7 in Double Purpose Bovine Faeces Samples from the Miranda Municipality, stan Zulia, Wenezuela. Wielebny Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Dostępne pod adresem: scielo.org