BULION TETRATIONIANOWY: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Bulion tetrationian lub bulion TT selektywnym płynne podłoże hodowlane dla wzbogacenia i odzyskiwanie szczepów rodzaju Salmonella. Został stworzony przez Müellera, a później zmodyfikowany przez Kauffmanna, dlatego są tacy, którzy nazywają go bulionem Müeller-Kauffmann.

Oryginalna pożywka zawierała peptony proteozy, węglan wapnia i tiosiarczan sodu. Kauffmann dodał do niego sole żółciowe i stworzył kolejną modalność z jasnozielonym. Substancje te hamują wzrost bakterii z grupy coli, pozostawiając pożywkę wolną dla rozwoju bakterii chorobotwórczych, w tym przypadku Salmonelli.

Dodanie roztworu jodu i jodu do bulionu tetrationianowego. Źródło: Manuel Almagro Rivas

Modyfikacja była bardzo udana, ponieważ znacznie zwiększyła czułość podłoża. Z tego powodu jest obecnie przydatny do poszukiwania Salmonelli w każdym typie próbki, ale szczególnie w stałych lub płynnych stolcach i pożywieniu.

Jego przygotowanie składa się z dwóch faz; Handlowe podłoże stanowi podstawę do przygotowania bulionu tetrationianowego, a następnie, aby można było utworzyć tetrationian, dodaje się jodowany roztwór jodu w celu uzupełnienia podłoża.

Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) zaleca stosowanie bulionu tetrationowego z dodatkiem jasnozielonego do wzbogacania próbek Salmonelli, ponieważ jest bardziej selektywny niż bulion tetrationianowy i bulion selenitowy.

Zasadniczo bulion tetrationianowy jest idealny, gdy podejrzewa się obecność bakterii z rodzaju Salmonella w małych ilościach lub gdy są one nadużywane poprzez narażenie na substancje hamujące lub procesy przemysłowe, które minimalizują ich żywotność.

Podstawa

Obecne peptony odpowiadają trzustkowemu trawieniu kazeiny i trawiennemu trawieniu tkanki zwierzęcej. Stanowią one źródło węgla, azotu i ogólnych składników odżywczych dla wzrostu bakterii.

Ze swojej strony tiosiarczan sodu reaguje z roztworem jodu, tworząc tetrationian. To hamuje rozwój bakterii z grupy coli i sprzyja rozwojowi bakterii, które zawierają enzym reduktazę tetrationianową, w tym rodzaj Salmonella, ale także Proteus.

Sole żółci działają również jako substancja hamująca dla większości bakterii Gram-dodatnich i niektórych Gram-ujemnych (pałeczki z grupy coli).

Węglan wapnia absorbuje toksyczne substancje powstające w wyniku rozkładu tetrationianu, który tworzy kwas siarkowy. W tym sensie węglan wapnia neutralizuje kwasowość, utrzymując stabilne pH pożywki.

W przypadku modalności jasnozielonej substancja ta zwiększa selektywną moc bulionu tetrationianowego poprzez hamowanie mikroorganizmów innych niż z rodzaju Salmonella.

Przygotowanie

- Bulion czterationowy

Roztwór jodu jodu

Ważyć:

• 6 gramów jodu.
• 5 g jodku potasu.

Jodek potasu rozpuszcza się w około 5 ml jałowej wody destylowanej, a następnie stopniowo dodaje jod podczas ogrzewania mieszaniny. Po całkowitym rozpuszczeniu uzupełnić do kreski jałową wodą destylowaną do uzyskania końcowej objętości 20 ml.

Podłoże bazowe do bulionu czterationianowego

Odważyć 46 gramów odwodnionej pożywki i zawiesić w 1 litrze sterylnej wody destylowanej. Mieszaj i podgrzewaj do całkowitego rozpuszczenia, może doprowadzić do wrzenia tylko przez kilka minut. Nie autoklawować. Podstawę pożywki pozostawia się do ostygnięcia do około 45 ° C i w tym czasie dodaje się 20 ml jodowanego roztworu.

Po dodaniu jodowanego roztworu do pożywki należy go natychmiast zużyć. Jeśli nie chcesz użyć całej mieszanki, wykonaj następujące czynności:

Do probówek rozlewa się 10 ml podłoża podstawowego, a tylko do tych, które mają być zaszczepione próbkami, dodaje się 0,2 ml roztworu jodowanego.

Te, które nie będą używane, można nadal przechowywać w lodówce, jednak ponieważ podłoże nie jest sterylizowane, najlepiej jest przygotować dokładnie taką ilość, jaka jest potrzebna.

Pożywka przed dodaniem roztworu jodowanego jodu jest mlecznobiała z białym osadem, a po dodaniu jest brązowa z gęstym osadem. Obserwowany osad jest normalny i odpowiada nierozpuszczalnemu węglanowi wapnia. Końcowe pH pożywki wynosi 8,4 ± 0,2.

- Wariant bulionu czterationowego z jasnozielonym

Aby przygotować jasnozielony bulion tetrationianowy, wykonuje się wszystkie opisane powyżej kroki, ale dodatkowo do mieszaniny zostanie dodane 10 ml jasnozielonego roztworu przygotowanego na 0,1%.

Lśniąca zieleń

To rozwiązanie przygotowuje się w następujący sposób:

Odważyć 0,1 g jasnozielonego i zawiesić w 100 ml wody destylowanej. Ogrzać do wrzenia, aby uzyskać całkowite rozpuszczenie. Przechowywać w bursztynowej butelce.

Posługiwać się

W przypadku próbek kału (posiew kału) protokół jest następujący:

Zaszczep 1 g stałego stolca lub 1 ml płynnego stolca w probówce zawierającej 10 ml gotowego do użycia bulionu tetrationianowego. Energicznie wstrząsnąć i inkubować w warunkach tlenowych w 43 ° C przez 6-24 godziny.

Następnie weź 10-20 µl podwielokrotności bulionu i posiej hodowlę w selektywnej pożywce dla Salmonelli, takiej jak między innymi agar SS, agar XLD, jasnozielony agar, Hektoen enteric agar.

Równolegle pożywki selektywne dla Salmonelli należy zaszczepić bezpośrednią próbką (kałem) bez wzbogacania. W przypadku wymazów z odbytu należy przenieść pobrany materiał do probówki i postępować zgodnie z powyższym opisem.

W przypadku próbek żywności odważ 10 g pokarmu stałego lub 10 ml pokarmu płynnego i zaszczep butelkę 100 ml gotowego do użycia bulionu tetrationianowego. Postępować w ten sam sposób, jak opisano powyżej, ale inkubować w 37 ° C.

Jak widać, relacja między próbką a bulionem zawsze będzie wynosić 1:10.

QA

Do testowania pożywki hodowlanej można zastosować znane szczepy kontrolne. Najpowszechniej stosowane są szczepy z certyfikatem ATCC.

Szczepy, które należy zastosować, to Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Oczekuje się doskonałego wzrostu dla szczepów Salmonella, podczas gdy Escherichia coli może wykazywać słaby lub regularny wzrost, a szczepy Gram-dodatnie (Enterococcus i Staphylococcus) są częściowo lub całkowicie zahamowane.

zalecenia

-Ponieważ to podłoże nie hamuje wzrostu Proteus, niektóre laboratoria używają 40 mg / l nowobiocyny, aby zapobiec rozwojowi tego szczepu drobnoustrojów. Antybiotyk należy dodać przed roztworem jodu.

-Po przygotowaniu pożywki zawierającej roztwór jodu jodu, inokulacja nie powinna zająć więcej niż 2 godziny.

-Podczas rozprowadzania pożywki w probówkach, mieszanina musi być stale homogenizowana w celu ponownego zawieszenia utworzonego osadu.

-W mniej zanieczyszczonych próbkach, bulion tetrationianowy jest inkubowany w temperaturze 35-37 ° C, aw przypadku próbek silnie zanieczyszczonych, w temperaturze 43 ° C.

Bibliografia

1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Baza bulionu tetrationianowego według Müeller-Kauffmann. Dostępne w:
2. BD Laboratories. 2003. Baza bulionu tetrationianowego. Dostępne w:
3. Britannia Laboratories. 2015. Bulion na bazie tetranatu. Dostępne w:
4. BBL Media. 2005. Przygotowany w probówkach do hodowli gatunku Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porównanie pożywek hodowlanych selenianu sodu i tetrationianu sodu, inkubowane w 37 ° C i 42 ° C w izolacja Salmonella spp. z kału nosicieli. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220