BULION TIOGLIKOLANOWY: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Tioglikolan bulion jest medium wzbogaconego konsystencja płynu. Jest znany pod akronimem FTM ze względu na jego akronim w English Fluid Thioglycollate Medium. Został stworzony przez Brewera i zmodyfikowany w 1944 roku przez Verę, która dodała do niego pepton kazeinowy.

Pożywka ta ma niski potencjał utleniająco-redukcyjny, dlatego nie jest zalecana do rozwoju bakterii ściśle tlenowych, ale jest idealna do odzyskiwania fakultatywnych tlenowych, ścisłych beztlenowych i mało wymagających bakterii mikroaerofilnych.

Bulion tioglikolanowy bez wskaźnika. Pokazuje wydzielinę z pochwy. Źródło: Bobjgalindo

Wysoka wydajność obserwowana z tą pożywką w izolacji i odzyskiwaniu szerokiej gamy mikroorganizmów sprawiła, że ​​została zaakceptowana przez Farmakopeę Stanów Zjednoczonych (USP), przez Oficjalne Stowarzyszenie Chemików Rolniczych (AOAC) i przez Farmakopeę Europejską ( EP).

Organizacje te zalecają go do testowania kontroli sterylności produktów farmaceutycznych oraz do wzbogacania różnego rodzaju próbek.

Tioglikolan cado składa się z ekstraktu drożdżowego, trzustkowego hydrolizatu kazeiny, bezwodnej dekstrozy, L-cystyny, chlorku sodu, tioglikolanu sodu, resazuryny i agaru w niewielkiej ilości.

Istnieje kilka wersji tego podłoża, między innymi: bulion tioglikolanowy ze wskaźnikiem, bulion tioglikolanowy bez wskaźnika, bulion tioglikolanowy ze wskaźnikiem wzbogacony o heminę i witaminę K ₁ oraz bulion tioglikolanowy z węglanem wapnia.

Warto zauważyć, że wariant bulionu tioglikolanowego wzbogacony o heminę i witaminę K służy do zwiększania wzrostu wybrednych beztlenowców, a wariant bulionu tioglikolanowego zawierający węglan wapnia jest przydatny do przeciwdziałania kwasom wytwarzanym podczas wzrostu drobnoustrojów.

Podstawa

Bulion z tioglikolanem jest uważany za nieselektywną pożywkę wzbogacającą, ponieważ umożliwia wzrost większości niewymagających bakterii bakterii. Zapotrzebowanie na składniki odżywcze zapewnia wyciąg z drożdży, trawienie trzustki i glukoza.

Z drugiej strony, to podłoże, mimo że jest bulionem, zawiera niewielką ilość agaru; Oznacza to, że ma niski potencjał oksydacyjno-redukcyjny, ze względu na to, że spowalnia wnikanie tlenu, w taki sposób, że zmniejsza się ilość tlenu w miarę wchodzenia w głąb rury.

Dlatego podłoże to jest idealne do rozwoju fakultatywnych bakterii tlenowych, mikroaerofilnych i ściśle beztlenowych, tych ostatnich 2 bez konieczności inkubacji w tych warunkach. To samo medium reguluje ilość tlenu w medium, którego nie ma na dnie rury, a dostateczna ilość na powierzchni.

Podobnie tioglikolan i L-cystyna działają jako środki redukujące, pomagając zapobiegać gromadzeniu się substancji szkodliwych dla rozwoju bakterii, takich jak nadtlenek. Ponadto związki te zawierają grupy sulfhydrylowe (-SH-), neutralizujące hamujące działanie pochodnych rtęci, arsenu, między innymi metali ciężkich.

Ze swojej strony resazurin jest wskaźnikiem redukcji tlenków. Substancja ta jest bezbarwna po redukcji i różowa po utlenieniu. Istnieją indykatorowe i nie-wskaźnikowe warianty bulionu z tioglikolanem. Jego użycie będzie zależało od rodzaju próbki i preferencji laboratorium.

Tymczasem chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną bulionu tioglikolanowego, a zastosowanie glukozy w postaci bezwodnej zapobiega nadmiernej wilgoci w odwodnionym medium.

Przygotowanie

Bulion tioglikolanowy ze wskaźnikiem

Odważyć 29,75 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Mieszaninę odstawia się na około 5 minut. Doprowadzić do źródła ciepła i często mieszać, aż do całkowitego rozpuszczenia.

Wlej pożywkę do probówek i autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut. Przed użyciem pozostaw do ostygnięcia. Sprawdź wkład domu komercyjnego pod kątem jego konserwacji. Niektórzy zalecają przechowywanie w temperaturze pokojowej w ciemnym miejscu, a inni w lodówce chronionej przed światłem.

PH przygotowanej pożywki wynosi 7,1 ± 0,2.

Odwodnione podłoże ma kolor jasnobeżowy, a przygotowane podłoże jest jasno bursztynowe z pewną opalizacją.

Bulion tioglikolanowy ze wskaźnikiem wzbogacony o heminę i witaminę K.

Istnieją komercyjne pożywki, które już zawierają heminę i witaminę K ₁ , szczególnie do hodowli beztlenowców.

Jeśli nie masz wzbogaconej pożywki dla beztlenowców, możesz przygotować podstawowy bulion tioglikolanowy. W tym celu na każdy litr podłoża _{dodaje się} 10 mg chlorowodorku heminy i 1 mg witaminy K ₁ . Jeśli jednak do bulionu tioglikolanowego dodaje się krew lub surowicę, dodanie heminy lub witaminy K nie jest konieczne.

Bulion tioglikolanowy z węglanem wapnia

Jest dostępny w sprzedaży i jest przygotowywany zgodnie z instrukcjami na wkładce.

Bulion tioglikolanowy bez wskaźnika

Ma ten sam skład co podstawowy tioglikolan, ale nie zawiera resazuryny.

Odważyć 30 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w litrze wody destylowanej. Reszta preparatu jest taka sama jak opisana w bulionie tioglikolanowym ze wskaźnikiem.

Posługiwać się

Bulion tioglikolanowy jest przydatny do wzbogacania próbek klinicznych, zwłaszcza pochodzących z miejsc sterylnych. Jest również przydatny w przypadku próbek nieklinicznych, takich jak kosmetyki, leki itp.

W celu zaszczepienia próbek płynnych (m.in. płynu mózgowo-rdzeniowego, mazi stawowej), próbki najpierw odwirowuje się, a następnie pobiera się 2 krople osadu i umieszcza w bulionie tioglikolanowym. Inkubować w temperaturze 35 ° C przez 24 godziny. Jeśli w tym czasie nie ma wzrostu (zmętnienia), inkubuje się maksymalnie do 7 dni.

Jeśli próbka jest pobierana wacikiem, pożywkę hodowlaną najpierw zaszczepia się na płytkach, a na koniec wymazówkę wprowadza się do bulionu, wystającą część rozłupuje się, a probówkę zakrywa się, pozostawiając wymazówkę w środku. Inkubować w temperaturze 35 ° C przez 24 godziny, maksymalnie 7 dni.

W przypadku próbek stałych homogenizować w roztworze soli fizjologicznej (SSF), a następnie zaszczepić bulion tioglikolanu 2 kroplami zawiesiny.

Czasami może być używany jako medium transportowe dla próbek, w przypadku których podejrzewa się ścisłe beztlenowce, lub jako zapasowy bulion do wzbogacania.

Odmiana bulionu tioglikolanowego z węglanem wapnia służy do utrzymania szczepów kontrolnych przez dłuższy czas, ponieważ posiada zdolność neutralizacji kwasów wytwarzanych przez glukozę; Te kwasy są toksyczne dla niektórych bakterii.

Wzrost w bulionie tioglikolanu będzie obserwowany przez zmętnienie podłoża. Zaleca się wykonanie barwienia metodą Grama, a następnie subkulturę na podłożach nieselektywnych i selektywnych, w zależności od rodzaju próbki i podejrzanych drobnoustrojów.

QA

W celu kontroli jałowości zaleca się inkubację jednego lub dwóch bulionów bez inokulacji. Oczekiwanym rezultatem jest klarowny bulion, bez zmiany koloru, chociaż normalne jest zobaczenie lekko różowego koloru na powierzchni probówki.

W celu kontroli jakości należy zaszczepić od 10 do 100 jtk certyfikowanych szczepów kontrolnych, takich jak Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes 11437 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubuj w temperaturze 30-35 ° C w warunkach tlenowych przez 24 godziny do maksymalnie 3 dni, ponieważ te mikroorganizmy szybko rosną.

Oczekuje się dobrego rozwoju we wszystkich przypadkach, z wyjątkiem Micrococcus luteus i Bacillus subtilis, gdzie może wystąpić umiarkowany rozwój.

Do kontroli jakości bulionu tioglikolanowego wzbogaconego heminą i witaminą K ₁ można zastosować szczepy kontrolne Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 i Bacteroides fragilis ATCC 25285. Oczekiwany wynik to zadowalający wzrost.

zalecenia

- Sporadycznie można zaobserwować, że powierzchnia bulionu tioglikolanowego ze wskaźnikiem zmienia kolor na różowy; Wynika to z utleniania medium. Jeśli różowy kolor pokrywa 30% lub więcej całkowitego bulionu, można go podgrzewać w łaźni wodnej przez 5 minut, ponownie ostudzić i użyć.

Spowoduje to usunięcie zaabsorbowanego tlenu, przywracając medium do pierwotnego koloru. Tę procedurę można wykonać tylko raz.

-Aby poprawić wzrost bakterii tlenowych, inkubować z lekko luźną pokrywką. Jednak w tym celu lepiej jest użyć bulionu do infuzji mózgu i serca lub bulionu tryptykazowo-sojowego, aby zapewnić prawidłowy rozwój ścisłych tlenowców.

-Należy unikać zamarzania medium lub jego przegrzania, ponieważ oba warunki uszkadzają medium.

-Bezpośrednie światło uszkadza pożywkę, należy ją przechowywać w miejscu chronionym przed światłem.

Bibliografia

1. Britannia Laboratories. Tioglikolan USP ze wskaźnikiem. 2015. Dostępne pod adresem: labBritania.com.
2. Laboratoria Chios Sas. 2019. Bulion tioglikolanowy. Dostępne pod adresem: quios.com.co
3. Laboratoria BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Dostępne pod adresem: bd.com/Europe
4. Pożywki BBL przygotowane w probówkach do hodowli mikroorganizmów beztlenowych. Media tioglikolanowe. 2013 Dostępne na: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.