TESTY KRZYŻOWE: DO CZEGO SŁUŻĄ, TECHNIKA, UZASADNIENIE, FAZY - MEDYCYNA

Crossmatch szereg badań laboratoryjnych w celu określenia, czy produkty z krwi dawcy krwi (głównie cały zapakowany kulistych) i są zgodne z krwią biorcy.

Jest to dodatkowy test uzupełniający względem zgodności ABO i współczynnika Rh. Powodem krzyżowego dopasowania jest to, że czasami dwie osoby (dawca-biorca) mogą mieć tę samą grupę ABO i Rh, ale ich krew jest nadal niezgodna.

Źródło: unsplash.com

Taka niezgodność jest spowodowana obecnością przeciwciał przeciwko szeregowi białek czerwonych krwinek znanych jako pomniejsze antygeny. Te antygeny nie są rutynowo testowane, ponieważ są one testowane na grupę krwi (ABO) i czynnik Rh.

Dzieje się tak, ponieważ pomniejsze antygeny występują znacznie rzadziej i mają zmienną ekspresję u każdego osobnika, w związku z czym praktycznie niemożliwe jest pogrupowanie ich w kategorie, jak ma to miejsce w przypadku grupy i czynnika Rh.

Zamiast tego czerwone krwinki dawcy miesza się z surowicą pacjenta (test dużego dopasowania) i krwinki czerwone pacjenta z surowicą dawcy (test mniejszego dopasowania) w celu wykrycia obecności reakcji antygen-przeciwciało.

Jeśli w surowicy pacjenta lub dawcy znajdują się przeciwciała przeciwko mniejszym antygenom, wynik testu jest pozytywny, więc w większości przypadków tej konkretnej jednostki krwi nie można przetoczyć.

Grupa ABO

Aby w pełni zrozumieć, na czym polegają reakcje krzyżowe, musisz najpierw poznać podstawy grup krwi.

W tym sensie najważniejsza jest wiedza, że krew można podzielić na cztery grupy: A, B, AB i O.

Każda z tych grup wykazuje ekspresję określonego białka (antygenu) na powierzchni krwinek czerwonych, które jest identyfikowane jako element obcy przez przeciwciała potencjalnego receptora z innej grupy.

Najbardziej uderzającą cechą reakcji antygen-przeciwciało podczas dopasowywania krwi jest to, że nie jest wymagana żadna wcześniejsza ekspozycja na antygen, aby istniały przeciwciała. Nazywa się to naturalnymi przeciwciałami.

Naturalne przeciwciała

Ogólnie rzecz biorąc, aby przeciwciała istniały w organizmie osobnika, konieczne jest, aby białe krwinki osobnika zostały wcześniej poddane działaniu antygenu.

Oznacza to, że w pierwszym kontakcie obcego antygenu z organizmem nie ma przeciwciał, ponieważ powstają one później, po pierwszym kontakcie. Dlatego nie jest możliwe, aby układ odpornościowy posiadał przeciwciała przeciwko na przykład konkretnemu wirusowi, jeśli nie był na nie narażony w przeszłości.

Jedynym wyjątkiem od powyższego są antygeny anty-AB. W takich przypadkach osoba ma przeciwciała przeciwko antygenowi, których nie mają jej czerwone krwinki, mimo że nigdy nie miała kontaktu z czerwonymi krwinkami innej osoby. Nazywa się to naturalnymi przeciwciałami.

Antygeny i przeciwciała związane z grupą krwi

Grupy krwi są określane w przypadku układu ABO na podstawie obecności specyficznych antygenów (A lub B) na błonie czerwonych krwinek oraz przeciwciał przeciwko nieobecnemu antygenowi na błonie erytrocytów.

Zatem osoba z grupą krwi A wyraża antygen A na powierzchni swoich czerwonych krwinek, podczas gdy w surowicy znajdują się przeciwciała anty-B.

Wręcz przeciwnie, u pacjentów z grupy B antygen B znajduje się, podczas gdy przeciwciała są anty-A.

Teraz pacjenci z krwią AB mają zarówno antygeny A, jak i B. Dlatego nie ma przeciwciał, ponieważ spowodowałoby to zniszczenie czerwonych krwinek tej osoby.

Zupełnie odwrotnie występuje w grupie O, gdzie błona erytrocytów nie wykazuje żadnego z dwóch antygenów (ani A, ani B), natomiast w surowicy występują przeciwciała anty-A i anty-B.

Niezgodność grupy ABO

Z powyższego można łatwo wywnioskować zgodność grup krwi ABO, ponieważ znając antygen błony erytrocytów, przeciwciała w surowicy są automatycznie znane. Po to aby:

- Krew A jest kompatybilna z grupą A i grupą O.

- Grupa krwi B jest zgodna z krwią B i O.

- Osoby z grupą O mogą otrzymać tylko krew 0 (ponieważ mają przeciwciała anty-A i anty-B), chociaż ich krew jest bez problemu przyjmowana przez wszystkie inne grupy, ponieważ nie ma w niej antygenów.

- Wreszcie. osoby z grupą krwi AB mogą otrzymać krew ze wszystkich innych grup (A, B, O i oczywiście AB), ponieważ nie mają przeciwciał przeciwko żadnemu z antygenów. Jednak tylko osoby z grupy AB mogą otrzymać krew AB, ponieważ wszystkie inne grupy mają przeciwciała, które zniszczyłyby te czerwone krwinki.

Mniejsze antygeny

Podobnie jak w przypadku grup ABO, na powierzchni erytrocytów można znaleźć szereg białek, które działają jako antygeny w taki sam sposób, jak antygeny z grupy ABO.

Jednak te antygeny nie są obecne u wszystkich osobników. Ich połączenie jest niejednorodne, a penetracja (poziom ekspresji białka) jest zmienna, dlatego podział na grupy, takie jak ta, która istnieje dla ABO i Rh, jest niemożliwy. To stąd wywodzi swoją nazwę od „pomniejszych antygenów”, znanych również jako „antygeny o niskiej częstości występowania”.

Chociaż nie są one częste, mogą istnieć naturalne przeciwciała przeciwko mniejszym antygenom. Wśród nich najczęstsze to Lewis, MNS, anty N, Kell, Duffy, anti Fyb i Kidd. Wszyscy odpowiedzialni za bardzo poważne reakcje hemolityczne i poprzetoczeniowe.

Ponadto może wystąpić uczulenie na pomniejsze antygeny w wyniku wcześniejszego kontaktu, czy to ze wspomnianymi białkami antygenowymi, z powodu wcześniejszych transfuzji, czy z powodu odporności krzyżowej.

Odporność krzyżowa

Mówi się, że odporność krzyżowa występuje, gdy dwa antygeny z dwóch różnych źródeł (na przykład czerwonych krwinek i bakterii) są bardzo podobne, do tego stopnia, że przeciwciała przeciwko jednemu z tych białek antygenowych reagują również z drugim, ponieważ są prawie identyczne .

Aby lepiej to zrozumieć, weźmy poprzedni hipotetyczny przykład (antygeny z czerwonych krwinek i bakterii). W żadnym przypadku nie ma naturalnych przeciwciał, ale jeśli dana osoba zostanie narażona na działanie bakterii, wytworzą przeciwko niej przeciwciała.

Takie przeciwciała będą później reagować przeciwko erytrocytom, jeśli antygeny w erytrocytach są bardzo podobne do antygenów bakterii, które wywołały tworzenie przeciwciał.

Jeśli tak się stanie, czerwonych krwinek z tym konkretnym białkiem antygenowym nie można podać osobie, która ma przeciwciała, ponieważ nastąpiłoby odrzucenie. Na tym polega znaczenie reakcji krzyżowych.

Do czego służy dopasowanie krzyżowe?

Ponieważ nie jest możliwe pogrupowanie krwi różnych osób na podstawie mniejszych antygenów, jedynym sposobem sprawdzenia, czy we krwi jednej osoby są przeciwciała przeciwko podrzędnym antygenom czerwonych krwinek innej osoby, jest porównanie krzyżowe. .

W przypadkach, gdy obecne są przeciwciała, wyzwalana jest reakcja hemolizy lub aglutynacji, dlatego stwierdza się, że reakcja była pozytywna; to znaczy, istnieją przeciwciała przeciwko pomniejszym antygenom (chociaż nie wiadomo dokładnie, który). W przeciwnym razie wynik testu jest negatywny.

Podstawa

Dopasowania krzyżowe są oparte na reakcji antygen-przeciwciało. Dzięki nim można więc wykryć, czy w surowicy biorcy znajdują się przeciwciała przeciwko antygenom czerwonych krwinek dawcy (lub odwrotnie), indukując reakcję antygen-przeciwciało.

Jeśli nie ma przeciwciał, żadna reakcja nie zachodzi, a wynik testu jest ujemny. Wręcz przeciwnie, jeśli reakcja jest pozytywna (w czasie testu występuje hemoliza lub aglutynacja) można wywnioskować, że przeciwciała są obecne.

W tym sensie należy zauważyć, że zarówno w surowicy dawcy, jak i biorcy mogą występować przeciwciała przeciwko krwinkom czerwonym. Dlatego istnieją dwa rodzaje reakcji krzyżowych.

Rodzaje reakcji krzyżowych

W surowicy pacjenta mogą występować przeciwciała przeciwko erytrocytom dawcy; ale może również wystąpić sytuacja odwrotna, to znaczy przeciwciała w surowicy dawcy przeciwko krwinkom czerwonym pacjenta.

Dlatego istnieją dwa rodzaje dopasowania:

- Duży crossmatch.

- Niewielki crossmatch.

Oba typy są rutynowo wykonywane w banku krwi przed przetoczeniem produktów krwiopochodnych, ponieważ jeśli którykolwiek z testów jest pozytywny, istnieje wysokie ryzyko reakcji transfuzji, które mogą zagrozić życiu pacjenta.

Duży crossmatch

Ten test ocenia, czy surowica biorcy zawiera przeciwciała przeciwko czerwonym krwinkom dawcy.

W takim przypadku nie można podawać preparatów krwiopochodnych, ponieważ duża ilość przeciwciał obecnych w osoczu pacjenta bardzo szybko zniszczy czerwone krwinki dawcy, wywołując przy tym katastrofalne reakcje w organizmie biorcy. Te reakcje są tak poważne, że mogą zagrażać życiu.

Niewielki crossmatch

W takim przypadku określa się, czy w surowicy dawcy znajdują się przeciwciała przeciwko czerwonym krwinkom biorcy.

Jeśli tak, przeciwciała zaczną niszczyć erytrocyty biorcy. Jednak biorąc pod uwagę, że ilość przeciwciał jest ograniczona, reakcja jest mniej intensywna; chociaż nadal jest niebezpieczny.

Fazy

Zarówno główny, jak i pomocniczy mecz krzyżowy są podzielone na trzy fazy:

- sól fizjologiczna.

- Termiczna lub inkubacja.

- Coombs.

W pierwszej fazie krwinki czerwone i surowica są mieszane w roztworze soli. Następnie dodawana jest albumina i próbkę inkubowano w 37 ° C przez 30 minut, aby ostatecznie przejść do fazy koomba.

Technika

Technika próby krzyżowej jest stosunkowo prosta, ponieważ polega na dodaniu czerwonych krwinek dawcy do surowicy pacjenta (próba krzyżowa główna), a także erytrocytów biorcy do surowicy dawcy (próba krzyżowa niewielka).

Aby zaindukować reakcję antygen-przeciwciało w stosunkowo krótkim czasie, należy wykonać szereg standaryzowanych etapów. Poniżej podsumowano te kroki w uproszczony sposób.

Należy zauważyć, że następna sekcja opisuje główny test zgodności, chociaż kroki są takie same dla mniejszego testu zgodności, ale wymieniają pochodzenie czerwonych krwinek i surowicy.

Faza solankowa

- Dodaj do probówki 2 krople surowicy od biorcy (od dawcy, jeśli jest to drugorzędny test).

- Pobierz próbkę krwinek czerwonych od dawcy (od biorcy, jeśli jest to mniejszy test krzyżowy).

- Umyj i odwiruj czerwone krwinki.

- Zawieś ponownie w roztworze od 3% do 5%.

- Umieść kroplę tego roztworu w probówce z surowicą biorcy.

- Delikatnie wymieszać.

- Odwirować.

- Odczytaj wynik na lampce wyświetlacza.

Faza termiczna

- Dodaj 2 krople 22% albuminy do probówki, w której zakończyła się faza soli fizjologicznej.

- Inkubować w 37ºC przez 30 minut.

- Wirować przez 15 sekund.

- Odczytaj wynik na lampce wyświetlacza.

Faza Coombsa

- Wyjmij komórki z probówki i przemyj je roztworem soli.

- Usunąć supernatant.

- Dodaj dwie krople odczynnika Coombsa.