RÓŻA BENGALSKA: UZASADNIENIE, PROCEDURA, KONTROLA JAKOŚCI - MEDYCYNA - 2026

Róż bengalski to test laboratoryjny oparty na reakcji antygen-przeciwciało do diagnozy brucelozy. Technika umożliwia wykrycie specyficznych przeciwciał przeciwko bakterii Brucella abortus w próbkach surowicy ludzkiej. Wynik można podać jakościowo lub półilościowo.

Forma jakościowa określa, czy pacjent ma pozytywny, czy negatywny wynik testu, to znaczy, czy występują przeciwciała. W międzyczasie raport półilościowy jest podawany w IU / ml i wskazuje przybliżoną ilość obecnych przeciwciał. Należy zauważyć, że przeciwciała będą produkowane tylko wtedy, gdy pacjent miał kontakt z mikroorganizmem.

Reakcja z różem bengalskim na płytce aglutynacyjnej. Źródło: zaczerpnięte z filmu https://youtu.be/igAVQ-GiyGY

Ze względu na swoją wielką prostotę, wysoką czułość i swoistość jest jedną z najczęściej stosowanych w medycynie technik seroaglutynacji jako wstępny test do diagnozy tej choroby.

Niektórzy badacze porównali skuteczność testu z różem bengalskim z innymi technikami, takimi jak seroaglutynacja (antygeny gorączkowe) i zauważyli, że chociaż istnieje dobra korelacja, widzieli pojedyncze przypadki, w których test na antygen gorączkowy był ujemny, a Rosa de Pozytywny błysk.

Uzyskana różnica wynikała z faktu, że pacjenci ci mieli podklasę przeciwciał IgG przeciwko Brucella abortus o lepszej zdolności wiązania w kwaśnym pH, dlatego mogli reagować z odczynnikiem Rose Bengal, ale nie z antygenami gorączkowymi.

W tym sensie zasugerowali, że odczynniki stosowane w technice antygenów gorączkowych należy zmodyfikować do kwaśnego pH, aby mogły wykryć ten typ przypadku.

Podstawa

Odczynnik różu bengalskiego składa się z zawiesiny antygenowej. Składa się ze szczepu S99 Brucella abortus, rozcieńczonego w kwaśnym buforze mleczanowym (pH 3,6), z dodatkiem fenolu i barwnika Rose Bengal.

Dlatego w próbce poszukiwane są przeciwciała anty-Brucella, jeśli są obecne, zareagują z antygenem odczynnika i zostanie zaobserwowana makroskopowo widoczna reakcja aglutynacji. Test wykrywa przeciwciała IgM lub IgG.

Oznacza to, że może wykryć chorobę zarówno w jej ostrej fazie, w której przeważają przeciwciała IgM, jak iw jej przewlekłej fazie, w której dominują przeciwciała IgG.

Stanowi to zaletę, ponieważ zwiększa czułość testu, ale jednocześnie jest wadą, ponieważ nie odróżnia jednego etapu od drugiego, ponieważ reakcja z przeciwciałami IgM i IgG jest identyczna.

Test należy zawsze wykonywać razem z kontrolą negatywną i kontrolą pozytywną. Kontrola negatywna zawiera surowicę zwierzęcą bez przeciwciał, a kontrola pozytywna zawiera surowicę pochodzenia zwierzęcego z 50 jm / ml przeciwciał przeciwko Brucella.

Posługiwać się

Bruceloza jest poważną chorobą, która z reguły jest przewlekła i niebezpieczna, dlatego bardzo ważne jest, aby ją wcześnie zdiagnozować. Jest to choroba odzwierzęca, a ludzie mogą zarazić się poprzez bezpośredni kontakt ze skażonym materiałem, przy czym najbardziej narażonymi osobami są weterynarze i opiekunowie zwierząt.

Do zakażenia może również dojść poprzez spożywanie zakażonego surowego mięsa, między innymi w wyniku infekcji.

Ta choroba atakuje lokalnie lub ogólnoustrojowo. Postać ogólnoustrojowa jest najpoważniejsza, ponieważ może dotyczyć różnych narządów, w tym układu śródbłonka siateczki (wątroba, śledziona, szpik kostny), skóry (zapalenie tkanki łącznej i powiększenie węzłów chłonnych), układu oddechowego (zapalenie płuc), układu mięśniowo-szkieletowego (zapalenie stawów, zapalenie stawów krzyżowo-biodrowych i kręgosłupa), między innymi.

Test z różem bengalskim jest bardzo przydatną techniką do przeprowadzenia wstępnego badania przesiewowego, ponieważ jest bardzo tani, łatwy w użyciu i ma dużą specyficzność i czułość.

Przypadki wyników fałszywie ujemnych i fałszywie dodatnich są bardzo rzadkie i mogą wystąpić odpowiednio u osób z bardzo niskim mianem przeciwciał (<25 IU / ml) lub skrajnie wysokim (> 1000 IU / ml).

Proces

materiały

-Zestaw Rose Bengal

-Agglutynacja płyty białe tło

Pipeta -50 µl

-Rotator (opcjonalnie)

-Wir

Technika (metoda jakościowa)

Handlowe zestawy Rose Bengal są dostarczane z gotowymi do użycia odczynnikami.

-Operuj odczynniki przed rozpoczęciem pracy.

-Płytki aglutynacyjne mają narysowane kółka, każdy dla innej próbki. Użyj 3 kółek, pierwszego dla kontroli negatywnej, drugiego dla próbki, a trzeciego dla kontroli pozytywnej.

-Umieść kroplę lub 50 µl kontroli i próbki w odpowiednim kółku.

- Wymieszać odczynnik z róży bengalskiej za pomocą wiru. Umieść kroplę obok wcześniej umieszczonych.

- Wymieszaj z drewnianymi wykałaczkami (użyj po jednej dla każdej próbki lub kontroli). Wykonuj okrężne ruchy i rozsuń tak, aby zakryć całe koło.

Źródło: obrazy pobrane z Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Edytowany układ obrazu.

-Umieść płytkę na automatycznym rotatorze z prędkością od 80 do 100 obr./min lub obracaj ręcznie przez 4 minuty. Przeczytaj dowód na końcu tego czasu.

-Sprawdź, czy kontrole dały zgodnie z oczekiwaniami. Porównaj reakcję próbki testowej z kontrolami. Podać jako pozytywne, jeśli obserwuje się aglutynację i jako negatywne, jeśli nie ma aglutynacji.

Pozytywny wynik testu wskazuje, że u pacjenta występuje ilość równa lub większa niż 25 jm / ml przeciwciał przeciw Brucella.

Interpretacja reakcji pozytywnej (z aglutynacją) i negatywnej (bez aglutynacji). Źródło: Cytrulina. Edytowany obraz.

Technika (półilościowa)

Jeśli w reakcji jakościowej próbka jest silnie pozytywna, można ją określić częściowo ilościowo. W tym celu wykonuje się seryjne podwójne rozcieńczenia próbki roztworem soli fizjologicznej. Procedura opisana wcześniej jest przeprowadzana przy każdym rozcieńczeniu.

Jest również interpretowany przez makroskopową obserwację aglutynacji. Wynikiem będzie miano najwyższego rozcieńczenia, w którym zaobserwowano wynik dodatni.

Aby obliczyć przybliżoną wartość przeciwciał przeciw Brucella, stosuje się następujący wzór:

25 IU / ml x miano reakcji = IU / ml

Na przykład, jeśli pacjent w teście półilościowym ma wynik dodatni przy rozcieńczeniu ½, ¼ i 1/8, a od rozcieńczenia 1/16 zaczyna dawać wynik ujemny, oznacza to, że miano pacjenta wynosi 8 .

Stosowanie formuły:

25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml

QA

-Zestawy mają datę ważności i należy jej przestrzegać. Nie należy używać, jeśli upłynął termin ważności odczynnika.

-Podczas użytkowania upewnij się, że odczynnik nie zawiera cząstek stałych, ponieważ jest to oznaka zepsucia.

-Przechowywać w temperaturze od 2 do 8 ° C.

-Nie zamrażać, czynność ta powoduje nieodwracalne uszkodzenie odczynnika.

-Zawsze przeprowadzaj test razem z kontrolą negatywną i pozytywną.

- Technika toleruje próbki surowicy z pewnym stopniem lipemii i hemolizy, jednak nie zaleca się stosowania surowic nadmiernie lipemicznych i zhemolizowanych, oba warunki wpływają na wyniki testu.

-Zawsze przed rozpoczęciem analizy doprowadzić odczynniki do temperatury pokojowej.

-Nie interpretuj reakcji, które trwają dłużej niż zalecany czas, ponieważ generuje to raport fałszywie dodatnich, ponieważ po pewnym czasie odczynnik wytrąca się, symulując pozytywną reakcję.

-Technika jest w 100% czuła i ma swoistość 98%.

-Po półilościowym oznaczeniu 1000 IU / ml istnieje możliwość zaobserwowania efektu prozonalnego (fałszywie ujemny wynik z powodu nadmiaru przeciwciał w porównaniu z ilością antygenów).

Bibliografia

1. Rubio M, Barrio B i Díaz R. Wartość testów Rosa de Bengala, Coombs i kontr-immunoelektroforezy w diagnostyce przypadków ludzkiej brucelozy, w której aglutynacja surowicy jest ujemna. Katedra Mikrobiologii. Clinical Microbiology Service. Klinika Uniwersytecka. Uniwersytet Nawarry. 406-407. Dostępne pod adresem: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
2. „Bruceloza”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 6 grudnia 2019, 14:37 UTC. 18 grudnia 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
3. Laboratoria Monlab. Róża bengalska Monlab - test. Dostępne pod adresem: monlab.es/
4. Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Rev. Peru. Med. Exp. Zdrowie publiczne 1997; 14 (1): 63–66. Dostępne pod adresem: scielo.org
5. Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425–433. Dostępne pod adresem: scielo.conicyt.