ROZMAZ KRWI: CHARAKTERYSTYKA, RODZAJE, TECHNIKI I HISTOLOGIA - BIOLOGIA - 2025

Rozmaz krwi jest rozmaz krwi obwodowej , która jest używana do analizy składników obecnych w krwiobiegu. Obserwacja rozmazu krwi dostarcza danych hematologicznych, które są bardzo przydatne w diagnostyce i leczeniu wielu patologii.

Rozmaz krwi umożliwia ilościowe określenie liczby różnych typów białych krwinek (wzór leukocytów), a także analizę morfologii i kształtu erytrocytów, leukocytów i płytek krwi.

Przygotowanie rozmazu krwi. Źródło: krew w szklance laboratoryjnej. Public DomainPictures.net

W nim można wykryć nieprawidłowości w liczbie komórek, takie jak: leukocytoza lub leukopenia, limfocytoza lub limfopenia, neutrofilia lub neutropenia, trombocytoza lub trombocytopenia i eozynofilia. Można również zauważyć nieprawidłowości w wielkości i kształcie komórek.

Dodatkowo można wykryć różnego rodzaju anemie, białaczki, infekcje bakteryjne lub pasożytnicze krwi.

W tym celu wykonuje się różne rodzaje rozmazów w zależności od celu badania. Są cienkie i grube rozmazy. Te rozmazy różnią się techniką wykonania i celem badania.

Te z drobnymi kroplami są używane jako dodatek do pełnej hematologii. Zapewnia to dane na temat formuły leukocytów, oprócz analizy kształtu i morfologii trzech serii komórek tworzących krew: serii czerwonej, białej i płytek krwi. Chociaż służą również jako uzupełnienie badania grubego filmu krwi.

Gruby film służy do diagnostyki chorób wywoływanych przez hemopasożyty, takich jak malaria lub malaria, toksoplazmoza, leiszmanioza, choroba Chagasa, babeszjoza i mikrofilarioza.

Charakterystyka rozmazu krwi

Dobry rozmaz krwi musi spełniać określone cechy. Wśród nich możemy wymienić:

- Aby próbka była reprezentatywna, musi spełniać minimalne wymagania jakościowe.

- Pobieranie próbek musi być dobrze przeprowadzone.

-Terminowe wykonanie rozmazu.

-Jeśli jest wykonywany z krwią żylną, użyj antykoagulantu, który nie powoduje deformacji komórek i wymieszaj rurkę przed wykonaniem rozmazu.

-Jeśli jest to zrobione z krwią włośniczkową, wyrzuć pierwszą kroplę.

- Rozprzestrzenianie się musi być jednorodne. Dzięki temu komórki są równomiernie rozmieszczone, a komórki krwi można dobrze przeanalizować pod kątem kształtu i liczby.

-Boki rozmazu powinny być gładkie od początku do końca.

- Rozmaz musi zachowywać margines od 1 do 2 mm po bokach szkiełka.

-Grubość warstwy rozprowadzanej powinna stopniowo zmniejszać się od początku do końca (rozmazanie drobnych kropel metodą ślizgową).

-Musi być odpowiednio oznakowany, aby uniknąć pomylenia próbki.

-Naprawić i odpowiednio zabarwić, aby zapewnić wyraźną obserwację elementów krwi.

-Przed zamontowaniem preparatu pod mikroskopem odczekać, aż rozmaz wyschnie. Nałożenie olejku immersyjnego na mokry rozmaz spowoduje tworzenie się miceli, które uniemożliwiają widoczność komórek.

Rodzaje rozmazów krwi

Rozmaz krwi obwodowej można podzielić na cienki i gruby. Te z cienką warstwą służą do badania formuły leukocytów i morfologicznej obserwacji krwinek. Można również zaobserwować bakterie pozakomórkowe, takie jak borrelia i hemopasożyty wewnątrzkomórkowe, takie jak między innymi plazmodium.

W drobnej kropli można zidentyfikować gatunek pasożyta, dlatego jest to bardziej specyficzna technika niż gruba kropelka, ale gruba kropelka jest bardziej wrażliwa, ponieważ jest to technika koncentracji wykorzystywana do wyczerpujących poszukiwań zewnątrzkomórkowych hemopasożytów.

Istnieją dwa rodzaje rozmazów z drobnych kropli: wykonywane na szkiełkach nakrywkowych i wykonywane na szkiełkach nakrywkowych. Na szkiełkach wykonuje się grube rozmazy.

Techniki pobierania próbek krwi

Rozmaz krwi można wykonać z nakłucia naczyń włosowatych lub próbki żylnej pobranej z antykoagulantem. Jeśli jest wykonywany z krwi z antykoagulantem, rozmaz można przygotować do 2 godzin po pobraniu próbki.

Należy zachować ostrożność przy stosowaniu antykoagulantów, które nie powodują deformacji krwinek. Najlepszą opcją jest EDTA. Wręcz przeciwnie, należy unikać stosowania antykoagulantów, takich jak cytrynian trójsodowy.

Jeśli próbka jest pobierana przez nakłucie kapilarne, rozmaz należy przedłużyć natychmiast, zanim skrzepi się krew.

Pierwszą kroplę należy wyrzucić, umożliwiając spontaniczne wypłynięcie następnej kropli, aby uniknąć rozcieńczenia próbki płynem tkankowym. Jest to najbardziej zalecana technika do obserwacji morfologii komórek, ponieważ krew nie zawiera żadnych dodatków.

Solari i wsp. Do obserwacji hemopasożytów doszli do wniosku, że obie techniki (nakłucie żylne i kapilarne) są równie skuteczne.

Rodzaje pobierania krwi: A. Nakłucie naczyń włosowatych. B. Nakłucie żylne. Źródło: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Techniki przygotowania rozmazu krwi

Rozmaz krwi można wykonać ręcznie na szkiełkach mikroskopowych lub na szkiełku nakrywkowym lub szkiełku nakrywkowym. Jest to również możliwe dzięki automatycznemu wyposażeniu.

-Slajdy rozmazują się

Jest to technika preferowana przez większość laboratoriów ze względu na łatwą obsługę.

Używając pipety Pasteura, umieść niezbyt grubą lub bardzo drobną kroplę krwi na środku jednego końca czystego szkiełka.

Rozmaz wykonuje się za pomocą innego szkiełka ze szlifowanym końcem. Szkiełko szlifowane jest umieszczane prostopadle do przeciwległego końca miejsca, w którym znajduje się kropla.

Przechyla się pod kątem od 30 do 45 ° i ślizga się w kierunku kropli; Po dotknięciu rozszerza się liniowo poza krawędź ślizgu podłoża i przy stałym i określonym ruchu powraca arkusz; przed osiągnięciem końca zjeżdżalnia jest podnoszona.

W ten sposób jednorodna warstwa jest rozprowadzana na powierzchni suwaka przyjmującego.

Rozmaz może wyschnąć. Następnie jest utrwalany i barwiony preferowaną bejcą. Przed obejrzeniem pod mikroskopem pozostaw do wyschnięcia. Kropla olejku jest umieszczana na twarzy ukazującej rozmaz i obserwowana pod mikroskopem świetlnym.

Rozmaz krwi na szkiełku. Górne zdjęcie: niewybarwiony rozmaz. Dolny obraz: poplamiony rozmaz. Źródło: Coinmac

Fragmenty wymazu wykonane na szkiełkach

W tego typu wymazie można wyróżnić trzy określone obszary: głowę, tułów i ogon. Głowa odpowiada obszarowi, w którym zaczyna się rozmaz, jest to najgrubszy obszar i nie jest dobrze obserwować.

Ciało jest centralną lub pośrednią częścią rozmazu, jest to najlepszy obszar do obserwacji pod mikroskopem, ponieważ komórki są tam równomiernie rozmieszczone i zachowana jest ich morfologia.

Ogon odpowiada końcowej części rozmazu; tutaj rozkład nie jest już jednolity, a morfologia erytrocytów ma tendencję do zaniku.

Kontrola jakości w technice slajdów

W tej technice odgrywa fundamentalną rolę:

-Czyszczenie i odtłuszczanie szkiełka: gwarantuje dobre ślizganie się próbki.

-Rozmiar kropli: przy bardzo dużych kroplach uzyskany zostanie grubszy i dłuższy rozmaz, przy bardzo małej kropli rozprysk będzie krótszy i wyjątkowo drobny.

-Prędkość zastosowana w przedłużeniu: im niższa prędkość rozmaz będzie cieńszy, tym większa prędkość będzie grubszy.

-Kąt wykonania: im mniejszy kąt, tym drobniejszy rozmaz, tym większy kąt, tym grubszy.

-Step na szkiełku nakrywkowym

Nie jest szeroko stosowany, ponieważ posługiwanie się delikatnymi szkiełkami nakrywkowymi jest uciążliwe, jednak oferuje duże korzyści, ponieważ uzyskuje się lepsze rozmieszczenie komórek w całym rozmazie.

Niezbyt grubą, niezbyt drobną kroplę umieszcza się na środku szkiełka nakrywkowego. Natychmiast umieszcza się na nim kolejny szkiełko nakrywkowe w taki sposób, że końce obu szkiełek wystają, tworząc gwiazdę.

Kropla samorzutnie rozprzestrzeni się po powierzchni obu szkiełek nakrywkowych. Na końcu wysuwu każdy slajd jest szybko przesuwany na przeciwległą stronę (jeden w prawo, a drugi w lewo).

Technika zapewnia dwa rozmazy zamiast jednego.

Są one umieszczane do wyschnięcia rozłożoną stroną do góry. Po wyschnięciu jest utrwalany i barwiony wybraną techniką. Niech wyschnie. Kroplę olejku immersyjnego umieszcza się na szkiełku, rozmaz umieszcza się stroną rozmazaną do dołu i ogląda pod mikroskopem.

Kontrola jakości w technice szkiełek nakrywkowych

Aby uzyskać dobry rozmaz dla tej techniki, ważne jest, aby:

-Czyszczenie szkiełek nakrywkowych (ułatwia płynne przesuwanie próbki).

-Wielkość kropli (wpływa na grubość rozmazu).

- Szybkość, z jaką oddzielane są szkiełka nakrywkowe (wpływa na jednorodność rozprzestrzeniania się).

-Z automatycznym wyposażeniem

Można to zrobić za pośrednictwem dowolnej z tych drużyn: Spinner i Autoslide.

Spinner polega na umieszczeniu szkiełka z kroplą krwi na specjalnej płytce wirówkowej. Próbka jest odwirowywana z dużą prędkością; w ten sposób powstaje jednorodna i delikatna smuga próbki. Wadą jest możliwość hemolizy próbki.

Autoslide to instrument, który mechanicznie wykonuje ruchy w celu wykonania wymazu na szkiełkach. Możesz również naprawić i zabrudzić rozmaz. Można go nawet dostosować do niektórych automatycznych liczników hematologicznych.

Technika grubego rozmazu

Do poszukiwania hemopasożytów zalecane są dwa rozmazy: jeden z drobną kroplą i drugi z grubą kroplą.

Wykonaj nakłucie kapilarne, wyczyść pierwszą kroplę. Umieść drobną kroplę na szkiełku i rozmaż, jak wyjaśniono wcześniej. Aby uzyskać grubą kulkę, umieść dużą kulkę na innym szkiełku i rozprowadź na kwadrat 1,55 mm. Pozwól obu rozmazom wyschnąć.

Plamy rozmazowe

Drobne krople można stosować między innymi plamy Giemsa lub Wright. Giemsa lub May-Grunwald Giemsa polecana jest do grubych rozmazy.

Plama Giemsa

Rozmaz utrwala się przez 3 minuty metanolem, odsącza i ponownie wysycha. Rozmaz jest następnie przykrywany plamą Giemsa na 10-15 minut. Myje się wodą destylowaną i pozostawia do wyschnięcia. Aby obserwować pod mikroskopem, umieszcza się kroplę olejku immersyjnego.

Plama Wrighta

Rozmaz jest pokryty plamą Wrighta przez 5 minut. Wyrzucić i umieścić roztwór buforowy o pH 6,8 na 6 minut. Przedmuchać preparat do homogenizacji. Umyć wodą destylowaną i pozostawić do wyschnięcia. Obserwuj pod mikroskopem.

Rodzaje wadliwych rozmazów

Występuje u kursantów w technice fine drop ze zjeżdżalniami.

Smugi z obszarami o różnej grubości (cienkie i grube przeplatane)

Dzieje się tak, ponieważ wykonywany ruch nie był stały podczas rozprzestrzeniania, powodując zatrzymanie i ponowne uruchomienie.

Bardzo krótki wymaz

Mają 2 przyczyny: jedna wynika z faktu, że ślizg gruntowy został podniesiony przed osiągnięciem drugiego końca ślizgacza. W tym przypadku jest niezwykle gruby i krótki.

Z drugiej strony, jeśli rozmaz jest krótki, ale cienki, to dlatego, że rozmiar kropli był bardzo mały.

Rozmazać zagrabionym obszarem pod koniec rozmazu

Przyczyn jest kilka: po pierwsze, krawędź szlifowana jest uszkodzona, nacisk wywierany na suwak przyjmujący zwiększa się w momencie rozpierania lub że krawędź szlifowana ślizgu jest zużyta.

Rozmazać z wakuolą lub wyraźnymi zaokrąglonymi lub eliptycznymi obszarami

Wynikają one z użycia tłustych smug (słabo umytych i odtłuszczonych).

Bardzo grube lub bardzo cienkie rozmazy

Krople, które są zbyt duże, od początku do końca spowodują bardzo grube rozmazy, a bardzo małe krople - bardzo drobne rozmazy.

Histologia

Komórki krwi można zobaczyć w rozmazie krwi. Wśród nich są:

-Erytrocyty lub krwinki czerwone

Ludzka krew, erytrocyty lub czerwone krwinki i dwa białe krwinki. Zaczerpnięte i zredagowane z: Viascos. Twoja obserwacja jest sprawą najwyższej wagi. Na tym poziomie można wykryć anemie, talasemię, chorobę szpiku kostnego itp.

Liczba erytrocytów lub krwinek czerwonych wynosi około 5 x 10 ⁶ mm3 u mężczyzn i 4,5 x 10 ⁶ u kobiet. Czerwone krwinki mają kształt dwuwklęsłych dysków, z centralną fizjologiczną bladością. Można je zobaczyć osobno (normalne) lub tworzące rouleaux (nienormalne).

W rozmazach również występuje poikilocytoza (czerwone krwinki o różnych kształtach), anizocytoza (czerwone krwinki o różnych rozmiarach), anizopoikilocytoza (różne kształty i rozmiary), anizochromia (różne kolory), erytroblasty (niedojrzałe czerwone krwinki), mikrocytoza (mniejsze czerwone krwinki) ) i makrocyty (większe erytrocyty).

Kiedy wykazują niedobór hemoglobiny i zwiększa się bladość centralna, mówi się, że występuje hipochromia. Kiedy obserwuje się normalną czerwoną serię, będzie ona zgłaszana jako normocytarna i normochromiczna.

-Białe krwinki lub leukocyty

białe krwinki

Normalna wielkość wynosi od 5 000 do 10 000 mm ³ . Zmieniają się w procesach zakaźnych, alergiach i białaczce. W rozmazie krwi można wyróżnić kilka typów, które wyjaśniono poniżej.

Segmentowane neutrofile

Stanowią 55-65% wszystkich leukocytów. Mierzą od 10 do 15 μm. Mają segmentowane lub płatkowe jądro, które przyjmuje różną morfologię, stąd nazywa się je polimorfojądrowe.

Mają obfite granulki neutrofilowe w swojej cytoplazmie i niektóre azurofily. Nasilają się infekcje bakteryjne (neutrofilia), zmniejszają infekcje wirusowe (neutropenia).

Można zaobserwować nieprawidłowości morfologiczne, takie jak pleokariocytoza (jądra hiper-segmentacyjne), łuki (komórki niedojrzałe) lub makropolice (owalne i duże).

Inne zmiany:

-Toksyczne granulacje

- Neutrofile Pseudo Pelgera (jądro nie jest płatkowe ani dwupłatkowe).

-Ciała Döhle'a: ciemnoniebieskie wtręty cytoplazmatyczne.

-Zwiększona bazofilia cytoplazmatyczna.

-Intracytoplazmatyczne wakuole.

-Piknoza komórkowa (utrata mostków międzyjądrowych).

Segmentowane eozynofile

Stanowią 1–3% wszystkich białych krwinek. Mierzą 9-10 μm. Charakteryzują się obecnością obfitych kwasofilnych ziarnistości cytoplazmatycznych i nielicznych azurofilów. Jego jądro ma dwa płaty. Ich liczba wzrasta w alergiach i chorobach pochodzenia pasożytniczego.

Bazofile podzielone na segmenty

Są niezwykle rzadkie i stanowią 0-1% leukocytów. Mierzą 10-12 μm. Jądro ma zwykle nieregularne brzegi i może być dwupłatkowe, ale nie jest widoczne z powodu dużej liczby zasadofilnych grubych granulek w cytoplazmie. Bardzo rzadko można zobaczyć bazofilię.

Limfocyty

Są to małe komórki z bazofilną cytoplazmą, z jądrem, dobrze zdefiniowane, okrągłe, ze skondensowaną chromatyną. Jądro obejmuje prawie całą komórkę. Stanowią 26-40% leukocytów krwi. Nasilają się infekcje wirusowe (limfocytoza). Można zobaczyć reaktywne limfocyty.

Monocyty

Komórki większe niż limfocyty, z większą cytoplazmą i luźniejszymi, owalnymi jądrami chromatyny. Mierzą 9-12 μm. Cytoplazma jest obfita i przy standardowych technikach barwienia zwykle wydaje się bladoszaroniebieska. Wśród zmian można zaobserwować wakuolowane monocyty i monocytozę.

-Płytki krwi

Mierzą od 1,5 do 3 μm. Jego kształt jest okrągły lub owalny. Normalna wartość waha się od 150 000 do 350 000 płytek krwi / mm3. Mogą zmniejszyć niektóre infekcje wirusowe. Nie mają jądra i są koloru fioletowego. W tej serii można zaobserwować nieprawidłowości, takie jak makro- lub mikropłytki krwi, trombocytoza lub trombocytopenia i fragmenty płytek krwi.

Elementy patologiczne

Pasożyty krwi

W rozmazach krwi można zobaczyć hemopasożyty, takie jak czynnik wywołujący malarię lub malarię (pasożyty z rodzaju Plasmodium). Z tego powodu ważne jest, aby rozmaz był analizowany ręcznie, ponieważ zautomatyzowany sprzęt pomija ten wynik.

Bakteria

W patologiach, takich jak nawracająca gorączka lub borelioza, można zaobserwować jej czynnik sprawczy. W tym przypadku odpowiada to krętkom Borrelia recurrenti i Borrelia burgdorferi w rozmazie krwi.

Niedojrzałe komórki

Ciężkie przypadki obserwuje się między innymi w białaczkach, reakcjach białaczkowych i reakcji leukoerytroblastycznej. W infekcjach bakteryjnych mogą występować niewielkie odchylenia w lewo (obecność oszustów). Erytroblasty można również zobaczyć w niektórych anemiach.

Bibliografia

1. Krew i tkanka krwiotwórcza. Dostępne pod adresem: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Kliniczna interpretacja laboratoryjna. 8th Edition. Artykuł redakcyjny Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Accounts A. Porównanie gęstości pasożytniczych w gęstej kropli krwi żylnej w porównaniu z akupresurą w diagnostyce Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Dostępne pod adresem: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Znaczenie badań rozmazów krwi obwodowej u osób starszych. Medisur 2017; 15 (3): 362–382. Dostępne pod adresem: scielo.sld
5. Grinspan S. Badanie rozmazu krwi obwodowej. Kontynuacja edukacji medycznej. Dostępne pod adresem: bvs.hn/RMH