ŚREDNIA SYMULACJA: PODSTAWA, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2025

Podłoże SIM to półstały agar różnicujący, specjalnie zaprojektowany, aby pomóc w identyfikacji niektórych bakterii, zwłaszcza Enterobacteriaceae. Składa się z tripteiny, peptonu, siarczanu żelaza, siarczanu amonu, tiosiarczanu sodu i agaru.

Medium to pozwala na wykonanie trzech ważnych testów: produkcji siarkowodoru (H ₂ S), tworzenia się indolu oraz ruchliwości, stąd pochodzi akronim SIM. Ze względu na swoją wielką użyteczność nie może być nieobecny w laboratorium bakteriologicznym.

A. Komercyjny nośnik SIM B. SIM H2S (-), test indolowy (-) i ruchliwości (+) oraz SIM H2S (+), indol (-), test ruchliwości (+). Źródło: A. Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa Gil B. Mfloayza

W przeciwieństwie do innych mediów musi być półstały, aby można było wykryć zdolność ruchu niektórych bakterii. W tym sensie test ten działa bardzo dobrze w przypadku Enterobacteriaceae, ale nie w przypadku niefermentujących pałeczek Gram-ujemnych, gdzie preferowane jest stosowanie innych metod, takich jak wisząca kropla.

Nośnik SIM pozwala na rozróżnienie pewnych specyficznych właściwości, które charakteryzują niektóre bakterie w stosunku do innych. Na przykład Escherichia coli wyróżnia się jako H ₂ S (-), indol (+) i ruchliwość (+), podczas gdy Proteus mirabilis to H ₂ S (+), indol (-), ruchliwość (+).

Podstawa

Jest to pożywka hodowlana uważana za zróżnicowaną, ponieważ jej zastosowanie pozwala na odróżnienie mikroorganizmów zdolnych do wytwarzania siarkowodoru od tych, które tego nie robią; podkreśla również te, które tworzą indol z tryptofanu od tych, które go nie tworzą, i ostatecznie odróżnia bakterie ruchome od nieruchomych.

Źródło prądu

Jak każda pożywka hodowlana zawiera elementy, które dostarczają niezbędnych składników odżywczych, aby mogły się rozwijać niewymagające mikroorganizmy. Te elementy są reprezentowane przez peptony i triptein.

Rozwój mikroorganizmu w pożywce jest niezbędny, aby móc zaobserwować obecność lub brak cech, które ocenia to podłoże.

Produkcja siarkowodoru

Litera S akronimu SIM odnosi się do produkcji siarkowodoru (H ₂ S). Bakterie zdolne do tworzenia siarkowodoru pobierają siarkę z tiosiarczanu sodu.

Po H ₂ S -colourless gaz tworzy się, że reaguje z solą żelaza w podłożu, tworząc siarczek żelazawy, wyraźnie widoczne (czarny osad). Bakterie, które nie tworzą H ₂ S, pozostawiają podłoże w oryginalnym kolorze (beż).

Obecność czarnego osadu może utrudniać interpretację ruchliwości. Jednak większość H ₂ S wytwarzania Enterobacteriaceae znane są dodatnio ruchliwe, takie jak Salmonella, Proteus i Citrobacter. Ponadto czarny osad pokrywający prawie całe podłoże sugeruje pozytywną ruchliwość.

Formacja indolowa

Druga litera akronimu SIM to „I”, która oznacza tworzenie indolu.

W tym sensie tripteina, oprócz tego, że jest źródłem składników odżywczych, spełnia inną podstawową funkcję. Ten pepton jest bogaty w aminokwas zwany tryptofanem, dlatego może wykazywać bakterie wytwarzające tryptofanazę.

Enzym ten jest odpowiedzialny za rozszczepianie aminokwasu tryptofanu, w wyniku czego powstaje indol (bezbarwna substancja), kwas pirogronowy i amon.

Dlatego, aby pokazać tę reakcję, konieczne jest dodanie substancji ujawniającej (odczynnik Ehrlicha lub odczynnik Kovaca). Każda z nich reaguje z indolem, tworząc czerwono-fuksjową substancję w kształcie pierścienia na powierzchni agaru. Jeśli pojawi się pierścień w kolorze fuksji, test indolowy jest interpretowany jako pozytywny.

Bakterie, które nie posiadają tego enzymu, nie utworzą pierścienia i jest to interpretowane jako ujemny test indolowy.

Należy zauważyć, że test indolowy powinien być interpretowany jako ostatni, ponieważ po dodaniu odczynnika podłoże staje się mętne, co utrudnia wizualizację ruchliwości.

Poruszanie się

Wreszcie litera „M” w słowie SIM oznacza ruchliwość. Aby ocenić ruchliwość, podłoże to jest strategicznie półstałe, ponieważ ta cecha jest niezbędna, aby móc obserwować, czy występuje ruch bakterii. Bakterie posiadające wici to te, które dają ten pozytywny wynik.

Pozytywny wynik testu będzie widoczny, gdy zaobserwuje się zmętnienie, zarówno w początkowym inokulum, jak i wokół niego. Natomiast bakterie niemotylne rozwijają się tylko na drodze początkowego inokulum.

Przygotowanie

Średnia karta SIM

Odważyć 30 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w litrze wody destylowanej. Mieszaninę odstawia się na 5 minut, a następnie ogrzewa do wrzenia, często mieszając do całkowitego rozpuszczenia.

Rozprowadź mieszaninę w probówkach z bawełnianymi nakrętkami i autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut. Wyjąć statyw na probówki z autoklawu i pozostawić do zestalenia w pozycji pionowej, tak aby pożywka miała kształt bloku.

W celu konserwacji jest przechowywany w lodówce do momentu użycia. Przygotowana pożywka musi mieć końcowe pH 7,3 ± 0,2.

W momencie inokulacji pożywka musi mieć temperaturę pokojową. Kolor środkowy to beż.

Odczynnik Kovaca

Odmierz 150 ml alkoholu amylowego, izoamylowego lub butylowego. (Użyj jednego z trzech wymienionych).

Rozpuścić 10 g p-dimetyloaminobenzaldehydu. Następnie powoli dodaj 50 ml stężonego kwasu solnego.

Gotowy do użycia odczynnik jest bezbarwny lub jasnożółty. Powinien być przechowywany w bursztynowej butelce i przechowywany w lodówce. Nie używać, jeśli zmieni kolor na ciemnobrązowy; co oznacza, że ​​jest uszkodzony. Ten odczynnik jest preferowany, jeśli chodzi o Enterobacteriaceae.

Odczynnik Erlicha

Odważyć 2 g p-dimetyloaminobenzaldehydu i rozpuścić w 190 ml absolutnego alkoholu etylowego i powoli wymieszać z 40 ml stężonego kwasu solnego. Przechowuj w ten sam sposób odczynnik Kovaca. Odczynnik Ehrlicha jest stosowany najczęściej w przypadku bakterii niefermentujących i beztlenowych.

Aplikacje

Podłoże SIM jest szeroko stosowane w laboratoriach bakteriologicznych. Jego zaletą jest to, że w tej samej probówce można zaobserwować trzy podstawowe cechy podczas identyfikacji Enterobacteriaceae.

Posiany

Prawidłowym sposobem wysiewu tego podłoża jest użycie igły, za pomocą której pobiera się część czystej kolonii do badania i umieszcza pionowo w środku podłoża. Należy wykonać pojedynczy wypad. Nakłucie nie powinno sięgać dna tuby, należy zakryć tylko dwie trzecie głębokości.

Nie zaleca się powtarzania inokulum, ponieważ może to prowadzić do fałszywych interpretacji pozytywnej ruchliwości. Zaszczepione podłoże jest inkubowane w warunkach tlenowych w 37 ° C przez 24 godziny.

Gdy czas zamknięte, to obserwuje się, czy też nie było wytwarzanie H ₂ S i ruchliwość jest odczytywany. Na koniec indol zostaje ujawniony, dodając 3 do 4 kropli odczynnika Ehrlicha lub Kovaca, delikatnie wymieszać i zinterpretować.

Źródło: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.

QA

Jako kontrolę sterylności jedną lub dwie probówki inkubuje się bez inokulacji w piecu w 37 ° C przez 24 godziny. Oczekuje się, że po tym czasie nie nastąpi wzrost ani zmiana koloru.

Jako kontrolę jakości można zastosować znane certyfikowane szczepy, takie jak: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Oczekiwane wyniki to: Escherichia coli H ₂ S ujemna, indolowa i dodatnia ruchliwość, Enterobacter aerogenes tylko dodatnia ruchliwość, Salmonella typhimurium H ₂ S i dodatnia ruchliwość, z ujemnym indolem. Wszystkie Proteus vulgaris są pozytywne, podczas gdy Klebsiella pneumoniae i Shigella są negatywne.

Ograniczenia

-Niektóre szczepy Morganella morganii, między innymi, mogą wytwarzać brązowawy pigment w tym podłożu ze względu na produkcję melaniny, nie należy tego mylić z osadem siarczku żelazawego. U niedoświadczonych profesjonalistów taka sytuacja może generować fałszywie dodatnie wyniki w interpretacji testu H ₂ S.

-Tlenowe bakterie będą rosnąć tylko na powierzchni probówki, co utrudni interpretację ruchliwości.

Bibliografia

1. BD Laboratories. BBL SIM Medium. 2008. Dostępne na: bd.com
2. Neogen Laboratories. Medium SIM. Dostępne pod adresem: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Medium SIM. 2009. Dostępne pod adresem: http://f-soria.es
4. Laboratorium Brizuela-Lab. Średnia karta SIM. Dostępne pod adresem: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Średnia karta SIM. 2015. Dostępne pod adresem: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.