MEDIUM STUARTA: PODKŁAD, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Średni Stuart jest półstałą agar lub rosół bez składników odżywczych, używane do transportu próbek biologicznych. Jego celem jest utrzymanie żywotności szczepów obecnych w próbce przez określony czas, ale bez zwiększania populacji drobnoustrojów.

Został stworzony przez Moffeta, Younga i Stuarta w 1948 roku, a później zmodyfikowany przez Toshacha i Patsulę. Składa się z glicerofosforanu sodu, tioglikolanu sodu, chlorku wapnia i agaru. Ten ostatni jest obecny w półstałym podłożu i nieobecny w cieczy. Niektóre laboratoria dodają do niego błękit metylenowy.

Culturette z transportem Stuarta. Źródło: przez: CDC / Dr. Gilda Jones, dzięki uprzejmości: Public Health Image Library

Zwykle stosuje się je, gdy nie jest możliwe natychmiastowe zasianie próbki. W takim przypadku próbkę umieszcza się na pożywce transportowej, a następnie przenosi do laboratorium, które będzie przetwarzać hodowlę.

W ten sposób gwarantuje się, że obecne mikroorganizmy pozostaną żywe, dopóki nie zostaną zaszczepione w odpowiednich pożywkach hodowlanych.

Początkowo jego zastosowanie miało na celu transport próbek z cewki moczowej lub pochwy, w których podejrzewano obecność Neisseria gonorrhoeae. Później zdali sobie sprawę, że jego użyteczność może być szersza.

Pożywka Stuarta okazała się bardzo skuteczna w ochronie nietrwałych i wymagających drobnoustrojów, takich jak między innymi Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis. Oprócz innych nieuciążliwych mikroorganizmów, takich jak Enterobacteria.

Pożywka Stuarta w zasadzie zapobiega wysychaniu próbki, utrzymuje równowagę osmotyczną i utrzymuje mikroorganizmy w idealnym pH. Z drugiej strony, strategicznie to podłoże nie zawiera składników odżywczych, co zapobiega namnażaniu się mikroorganizmów.

Na rynku dostępne są specjalne urządzenia do transportu próbek, które zawierają ten lub inny środek transportu, tzw. Culturette. Można je również przygotować w laboratorium.

Podstawa

Celem transportu Stuart jest utrzymanie próbek tak blisko ich pierwotnego stanu, dopóki nie zostaną przetworzone.

Glicerofosforan sodu i chlorek wapnia to układ buforowy, który działa poprzez utrzymanie pH i osmolarności.

Tymczasem tioglikolan sodu działa jako środek redukujący, aw przypadku agaru, nadaje mu półstałą konsystencję, opóźniając natlenienie podłoża. Wreszcie błękit metylenowy jest wskaźnikiem utleniania, to znaczy wykrywa obecność tlenu.

Półstałe podłoże ze wskaźnikiem redoks jest idealne do transportu próbek, w których podejrzewa się obecność bakterii beztlenowych.

Charakterystyka środków transportu

Medium Stuart, jak wszystkie środki transportu, posiada określone cechy, w tym:

-Utrzymuje żywotne szczepy drobnoustrojów obecne bez namnażania.

-Nie zawiera składników odżywczych; Jego związki mają na celu utrzymanie uwodnienia próbki, w odpowiednich warunkach pH i osmolarności.

-Usuwa autolizat niektórych delikatnych mikroorganizmów, takich jak pneumokoki.

-Jego użytkowanie jest tymczasowe, nie powinno być przedłużane zbyt długo.

Przygotowanie

Półstałe podłoże Stuarta ze wskaźnikiem redoks

Przygotowanie domu

Składniki

Glicerofosforan sodu 10 gr

Tioglikolan sodu 1,0 gr

Chlorek wapnia 0,1 gr

Błękit metylenowy 0,002 gr

Agar-agar 3 gr

Woda destylowana 1 L

Wymieszaj składniki i podgrzej do całkowitego rozpuszczenia. Wlać do probówek lub specjalnych wacików. Umieszcza się je w autoklawie i sterylizuje w temperaturze 121 ° C przez 15 minut. Pozwól rurkom ostygnąć w pozycji pionowej (w kształcie bloku). Przechowywać w temperaturze pokojowej.

Przygotowanie na pożywce handlowej

Odważyć 14,1 g pożywki w 1 litrze wody destylowanej. Często potrząsając ciepłem, aż do całkowitego rozpuszczenia, można go gotować. Pozostała część procedury, jak już opisano.

Odwodnione podłoże ma kolor kremowy, a przygotowana powierzchnia powinna mieć niebieski kolor. Wynika to z obecności błękitu metylenowego.

PH pożywki należy ustawić na 7,4 ± 0,2

Liquid Modified Stuart Medium (domowe)

Składniki

Glicerofosforan sodu 10 gr

Tioglikolan sodu 1 gr

Dihydrat chlorku wapnia 0,1 gr

Woda destylowana 1000 ml

Ma te same składniki co półstały, ale nie zawiera agaru ani błękitu metylenowego. W tym przypadku składniki miesza się bez podgrzewania, a 0,5 ml rozdziela się do probówek 16 x 125 mm z zakrętkami.

Jest sterylizowany w autoklawie w 121 ° C przez 10 minut. Do pobierania próbek należy użyć wymazów z dakronu, jeśli próbka jest przeznaczona do PCR lub sztucznej skóry, jeśli jest przeznaczona do hodowli.

Probówki są przechowywane w temperaturze pokojowej.

Aplikacje

W handlu istnieją specjalne urządzenia do transportu próbek zwane Culturette; To urządzenie jest wydłużoną, cienką rurką, która ma wewnątrz wymazówkę, a na końcu znajduje się segment zawierający półstałe lub płynne podłoże Stuarta.

Urządzenie jest otwierane i próbka jest pobierana wraz z wymazem. Następnie jest wprowadzany z powrotem do probówki, aż końcówka wacika zostanie włożona do półstałego podłoża transportowego; Niektórzy przynoszą gąbkę poliuretanową impregnowaną płynnym podłożem Stuarta, dzięki której próbka jest przechowywana w stanie mokrym.

W przypadku podejrzenia obecności delikatnych mikroorganizmów do pobrania próbki należy użyć wacików bawełnianych z węglem drzewnym.

Próbki, które można pobrać za pomocą wymazów lub wymazów i przenieść w tym podłożu, to wysięk z gardła, wymaz z odbytu i różne wydzieliny, w tym: z pochwy, cewki moczowej, rany, oka, ucha i ropnia.

Podczas przenoszenia próbki w medium transportowym do laboratorium należy unikać narażania medium na ekstremalne warunki środowiskowe (zbyt zimno lub zbyt gorąco). Należy również unikać nagłych zmian ciśnienia atmosferycznego.

Czas, w którym pożywka jest w stanie utrzymać żywotność mikroorganizmu, zależy od danego szczepu. Na przykład mikroorganizmy z rodzaju Neisserias i Haemophilus mogą zachować żywotność do 24 godzin, ale szczepy takie jak Salmonella lub Shigella mogą przetrwać dni, a nawet tygodnie.

Jeśli szacuje się, że przetwarzanie próbki może zająć więcej niż 4 dni, zaleca się zamrożenie próbki w temperaturze -70 ° C.

Identyfikacja próbki w środku transportu

Przygotowany środek transportu lub kultura handlowa musi posiadać etykietę, na której zostaną umieszczone następujące informacje:

Imię i nazwisko pacjenta: pozwala uniknąć pomylenia próbki.

Numer identyfikacyjny: wygodnie jest zachować zamówienie w pracy.

Źródło pobrania próbki: pomaga bakteriologowi wybrać odpowiednią pożywkę hodowlaną.

Lekarz prowadzący: Czasami konieczne są ewentualne konsultacje.

Data i godzina pobrania próbki: jest to niezbędne do przyjęcia lub odrzucenia próbki zgodnie z czasem, jaki upłynął od pobrania próbki do odbioru w laboratorium.

Inne informacje, które warto załączyć, to:

Wstępna diagnoza: kieruje dodaniem specjalnych pożywek hodowlanych zgodnie z podejrzewaną diagnozą.

Leczenie antybiotykami: warto dołączyć do antybiogramu.

Wszystkie te informacje są niezbędne do prawidłowego przetwarzania próbek.

QA

Aby ocenić działanie pożywki Stuarta, można zaszczepić znane szczepy i przechowywać je w temperaturze 25 ° C, takie jak: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.

We wszystkich przypadkach oczekuje się odzyskania danego mikroorganizmu, zakonserwowanego przez 24 godziny.

Z drugiej strony można zastosować inne szczepy, takie jak: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 i Escherichia coli ATCC 11775.

We wszystkich przypadkach obfity powrót do zdrowia jest oczekiwany do 96 godzin.

Ograniczenia

Niektóre badania zapewniają, że glicerofosforan obecny w pożywce Stuarta może być metabolizowany przez niektóre bakterie z grupy coli, między innymi bakterie Gram-ujemne, a zatem namnażać się w tym podłożu.

Ryzyko to wzrasta, im dłużej trwa przetwarzanie próbki. Podobnie ma na to wpływ wystawienie medium Stuarta na działanie wysokich temperatur podczas transportu.

Bibliografia

1. „Środek transportu (mikrobiologia)”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 13 kwietnia 2018, 10:36 UTC. 1 kwietnia 2019 r. Dostępne pod adresem: es.wikipedia.org
2. Microkit Laboratories: Culture Media. Stuart Transportation. Dostępne pod adresem: Dostępne pod adresem: Medioscultivo.com
3. LabLisan. Środki transportu Stuarta. Dostępne pod adresem: lablinsan.cl
4. Naukowe MDM. Zalety posiadania mikrobiologicznego podłoża transportowego Stuart. Dostępne pod adresem: mdmcientifica.com
5. Laboratoria Metrix. Stuart. Dostępne pod adresem: metrixlab.mx
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.