AGAR XLD: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2025

Podłoże agarowe XLD lub podłoże agarowe z ksylozą i dezoksycholanem to selektywna i zróżnicowana kultura stała do izolacji enteropatogenów. Taylor zaprojektował formułę agaru XL (ksyloza, lizyna) w celu poprawy izolacji z rodzaju Shigella.

Zauważył, że ten rodzaj był zahamowany w większości podłoży przeznaczonych do izolacji enteropatogenów. Następnie dodano dezoksycholan sodu, tiosiarczan sodu i cytrynian żelazowo-amonowy w celu zwiększenia jego selektywności. Formuła ta okazała się przydatna zarówno w izolacji Shigella, jak i Salmonella.

Różnice między koloniami Shigella, Salmonella i bakterii z grupy coli na agarze XLD. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Źródła: A. Autor: CDC / Amanda Moore, MT; Dr Todd Parker; Audra Marsh, dzięki uprzejmości: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Autor: CDC / Dr. JJ farmer, dzięki uprzejmości: Public Health Image Library

Agar XLD składa się z ekstraktu drożdżowego, dezoksycholanu sodu, ksylozy, lizyny, laktozy, sacharozy, tiosiarczanu sodu, cytrynianu amonu żelaza (III), chlorku sodu, czerwieni fenolowej i agaru. Duet XLD Agar i SS Agar są używane w większości laboratoriów bakteriologicznych do badania próbek kału pod kątem Shigella i Salmonella.

Inne laboratoria preferują połączenie agaru CHROMagar Salmonella i XLD, wśród innych dostępnych opcji. Te duety można przygotować na podwójnych szalkach Petriego. Po jednej stronie umieszczają agar XLD, a po przeciwnej stronie wybrane podłoże.

Podstawa

-Moc odżywcza

Agar XLD zawiera ekstrakt drożdżowy, który służy jako źródło składników odżywczych dla mikroorganizmów rosnących na tym agarze. Ponadto obecność węglowodanów (ksylozy, sacharozy i laktozy) zapewnia bakteriom energię, która może je fermentować.

-Selektywność medium

Jako substancja hamująca przedstawia dezoksycholan sodu; Zapobiega to rozwojowi bakterii Gram-dodatnich, nadając pożywce selektywny charakter.

-Różnicowa moc

Typowe kolonie Shigella

Jak już wspomniano, agar XLD zawiera ksylozę; Węglowodan ten jest fermentowany przez wszystkie bakterie, które rosną na tym podłożu z wyjątkiem rodzaju Shigella.

Jest to jedna z cech, która nadaje mu zróżnicowany charakter, ponieważ kolonie Shigella różnią się od reszty tworzeniem czerwonych kolonii, podczas gdy inne bakterie wytwarzają żółte kolonie.

Typowe kolonie Salmonelli

Rodzaj Salmonella również fermentuje ksylozę, początkowo tworząc żółte kolonie. Jednak po wyczerpaniu ksylozy węglowodanów atakuje lizynę ze względu na jej enzym dekarboksylazę lizyny. Dekarboksylacja lizyny generuje alkalia, które zmieniają kolor kolonii i otaczającego podłoża na pierwotnie czerwony.

Takie zachowanie jest wywoływane tylko przez Salmonellę, ponieważ pałeczki z grupy coli, które dekarboksylują lizynę, nie mogą alkalizować podłoża. Dzieje się tak, ponieważ bakterie z grupy coli również fermentują obecną laktozę i sacharozę; dlatego produkcja kwasów jest bardzo wysoka, pozostawiając żółtą kolonię w tych bakteriach.

Należy zauważyć, że rodzaj Salmonella nie powoduje fermentacji sacharozy ani laktozy.

Produkcja H.

XLD umożliwia również wykrywanie agar H ₂ S ' gatunku Salmonella wytwarzania ; W tym celu opiera się na źródle siarki reprezentowanym przez tiosiarczan sodu i wywoływacz reakcji, którym jest cytrynian amonowo-żelazowy.

Ta druga reaguje z H ₂ S (bezbarwnego gazu) i tworzy widoczną nierozpuszczalnego czarnego osadu siarczanu żelaza. W tym sensie cechy charakterystyczne kolonii salmonelli będą czerwone z czarnym środkiem.

Należy zauważyć, że aby zaszła reakcja tworzenia się H ₂ S, konieczne jest zasadowe pH. Dlatego innych Enterobacteriaceae, że postać H ₂ s nie można zrobić, czy to słabo na tym podłożu, ponieważ wysokiej kwasowości wytwarzanej przez fermentację węglowodanów obecnych hamuje lub utrudnia reakcji.

- Chlorek sodu, agar i czerwień fenolowa

Wreszcie chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną; agar jest czynnikiem zestalającym, a czerwień fenolowa wykrywa zmiany pH, zmieniając kolor kolonii i podłoża.

Przygotowanie

Odważyć 55 g odwodnionej pożywki XLD i rozpuścić w 1 litrze wody. Ogrzać i mieszać mieszaninę, aż osiągnie temperaturę wrzenia. Nie przegrzewać, ponieważ ciepło uszkadza podłoże i tworzy osad, który zmienia morfologię typowych kolonii.

To podłoże nie może być autoklawowane. Podczas rozpuszczania należy go przenieść do łaźni wodnej o temperaturze 50 ° C. Po schłodzeniu podawać bezpośrednio na sterylne szalki Petriego. Można je wylewać na pojedyncze talerze lub podwójne talerze. Pozostawia się je do zestalenia i przechowuje w lodówce do czasu użycia.

Odpuszczać przed użyciem. Ponieważ jest to podłoże niesterylne, zaleca się przygotowanie go w pobliżu daty użycia.

Końcowe pH pożywki powinno wynosić 7,4 ± 0,2. Kolor przygotowanego podłoża jest pomarańczowo-czerwony, półprzezroczysty, bez osadu.

Jeśli masz podstawowy agar z ksylozą i lizyną (XL), możesz dodać dezoksycholan sodu, tiosiarczan sodu i cytrynian żelazowo-amonowy. W ten sposób uzyskuje się formułę agaru XLD.

Aplikacje

Agar XLD służy do odzyskiwania enteropatogenów, głównie z rodzaju Shigella i wtórnie z rodzaju Salmonella. Jest to przydatne do oceny próbek kału, wody i żywności.

Rodzaje próbek

Kał

Próbki kału można wysiewać bezpośrednio na agarze XLD, zapewniając dobrą dystrybucję materiału w celu uzyskania izolowanych kolonii.

Aby poprawić regenerację Salmonelli, agar XLD można posiać z pożywki wzbogacającej Salmonella.

jedzenie

W przypadku żywności można stosować buliony wzbogacające Salmonella i Shigella. W przypadku Salmonelli można użyć m.in. bulionu seleninowo-cystynowego, jasnozielonego bulionu tetrationianowego.

W przypadku Shigella można ją wzbogacić bulionem Shigella z 0,5 µ / ml nowobiocyny, inkubować w temperaturze 42 ° ± 1 ° C przez 16–20 godzin.

woda

W analizie wody zaleca się między innymi technikę filtracji membranowej oraz użycie agaru XLD.

Warunki sadzenia i identyfikacji

Zaszczepione podłoże jest inkubowane w warunkach tlenowych w 35 ° C przez 24 do 48 godzin.

Obserwuje się typowe kolonie każdego rodzaju, podejrzane kolonie należy poddać testom biochemicznym w celu ich identyfikacji.

QA

Do oceny kontroli jakości podłoża można zastosować następujące szczepy bakterii: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Rodzaj Salmonella charakteryzuje się przedstawieniem czerwonych kolonii z czarnym środkiem lub całkowicie czarnych kolonii na tym podłożu. Natomiast w rodzaju Shigella kolonie muszą być czerwone, czyli kolor pożywki.

W przypadku Escherichia coli oczekuje się całkowitego lub częściowego zahamowania aktywności; jeśli rośnie, kolonie są żółte. W przypadku Proteus mirabilis spodziewany jest słaby wzrost z różowymi koloniami z lub bez czarnego środka. Ostatecznie rodzaj Klebsiella będzie rosnąć jako żółte kolonie.

Końcowe przemyślenia

Agar XLD jest szeroko stosowany w laboratoriach bakteriologicznych ze względu na jego wysoką skuteczność w odzyskiwaniu szczepów Shigella, a także zapewnia dobrą regenerację rodzaju Salmonella.

Rall i wsp. (2005) w swojej pracy zatytułowanej „Ocena trzech bulionów wzbogacających i pięciu stałych pożywek do wykrywania Salmonelli u drobiu” wykazali, że z 3 badanych klasycznych podłoży (jasnozielony agar, agar SS i agar XLD) Agar XLD miał najlepszy współczynnik odzysku.

Odsetki odzyskiwania były następujące: 13,8% dla jasnozielonego agaru, 27,6% dla SS i 34,5% dla XLD. Jedynie pożywki chromogenne przewyższały agar Rambacha z 48% odzyskiem i CHROMagar z 79,3%.

Bibliografia

1. Choroby pokarmowe. Shigellosis. Dostępne pod adresem: anmat.gov.ar
2. „Agar XLD”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 9 lutego 2019 r., 11:46 UTC. 10 kwietnia 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Dostępne na: bd.com
4. Lab. Neogen. Agar XLD. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen
5. Laboratorium Francisco Soria Melguizo. XLD Agar. Dostępne pod adresem: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Ocena trzech bulionów do wzbogacania i pięciu podłoży do wykrywania salmonelli u drobiu. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147–150. Dostępne pod adresem: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.