TEST KOAGULAZY: UZASADNIENIE, PROCEDURA I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2025

Test koagulazy jest techniką laboratoryjną stosowaną w celu wykrycia obecności enzymu koagulazy. Enzym ten ma właściwość koagulacji osocza. Loeb w 1903 roku jako pierwszy opisał ten enzym.

Test ten jest wykonywany na Gram-dodatnich, katalazododatnich ziarniakach, co pozwala na odróżnienie szczepów Staphylococcus aureus od pozostałych gronkowców, ponieważ jest to jedyny mikroorganizm o znaczeniu klinicznym, który go produkuje.

Oba obrazy pokazują pozytywny wynik testu koagulazy. Źródło: lewe zdjęcie: Philippinjl. Zdjęcie po prawej: Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa Gil.

W tym sensie, członkowie rodziny Staphylococaceae, którzy mają negatywny wynik testu, są często określani jako koagulazo-ujemne Staphylococcus.

Istnieją pewne szczepy inne niż S. aureus, które mogą wytwarzać koagulazę, takie jak Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S.medius i S. delphini.

Jednak pierwsze trzy mają znaczenie kliniczne na poziomie weterynaryjnym i bardzo rzadko można je znaleźć jako przyczynę zakażeń u ludzi, podczas gdy S. delphini występuje tylko w środowiskach morskich.

Ponadto są one łatwe do rozróżnienia, ponieważ S. hyicus i S.medius nie fermentują mannitolu, a S. schleiferi spp coagulans nie fermentuje maltozy ani trehalozy, podczas gdy S. aureus fermentuje te węglowodany.

Obecność enzymu koagulazy została powiązana z zjadliwością szczepów. Jednak teoria ta upadła, ponieważ obserwuje się inne zjadliwe gatunki koagulazo-ujemne zdolne do wywoływania poważnych infekcji.

Podstawa

Interpretacja

Aglutynacja w ciągu 5-20 sekund (silny pozytywny test).

Zmienna aglutynacja występująca między 20 sekundami a jedną minutą (opóźniony test pozytywny).

Pewien stopień aglutynacji po minucie (wątpliwe dowody). Zaleca się powtórzenie testu lub potwierdzenie metodą probówkową.

Nie ma aglutynacji (test negatywny).

Wynik z SSF. Zawsze musi dać wynik negatywny, jeśli da wynik pozytywny automatycznie, wynik testu jest nieważny.

-Test rurek na koagulazę

materiały

-Sterylna probówka

-Osocze

-Kąpiel Maryi w 37 ° C

Technika

Odpipetować 0,5 ml osocza do probówki 12 x 75 za pomocą jałowej pipety. Do platynowej pętli załadować 2 do 4 czystych kolonii do badania ze stałej kultury przez 18 do 24 godzin i rozpuścić w osoczu ostrożnie wymieszać i inkubować w 37 ° C przez 4 godziny.

Zbadaj probówkę przez pierwszą godzinę bez potrząsania, po prostu delikatnie ją przechyl. Jeśli skrzep nadal nie jest widoczny, można go obserwować co 30 minut, aż do zakończenia 4 godzin. Jeśli po 4 godzinach nadal jest ujemny, można go pozostawić do 24 godzin, ale w temperaturze pokojowej. Obserwuj i zgłoś wynik.

Opierając się na doświadczeniu, niektórzy mikrobiolodzy zalecają użycie 500 µl zawiesiny bakterii z 18-godzinnej hodowli w płynnej pożywce do wykonania testu.

Wydaje się, że zapewnia szybsze i bardziej wiarygodne wyniki niż w przypadku emulgowania kolonii z pożywek stałych, zwłaszcza jeśli zastosowano ludzkie osocze uzyskane z banku krwi.

Użycie szczepów z bulionu pomaga rozcieńczyć ewentualną obecność w osoczu ludzkich przeciwciał przeciw gronkowcom, które mogą hamować działanie koagulazy.

Interpretacja

W przypadku stwierdzenia skrzepu obejmującego cały płyn (krzepnięcie całkowite) lub skrzepu bez pozostałości płynu (krzepnięcie częściowe), należy to uznać za wynik pozytywny.

Jeśli nie utworzy się skrzep, to znaczy zawiesina pozostaje jednorodna, wynik testu jest ujemny.

-Test koagulazowy z użyciem fibrynogenu

Fibrynogen jest używany tak samo jak osocze i jest używany zarówno do testów szkiełkowych, jak i probówek. Postępuj zgodnie z opisem dla osocza i interpretuj w ten sam sposób.

Posługiwać się

Służy do różnicowania Staphylococcus aureus od gronkowców koagulazoujemnych.

QA

Mieć dostępne świeże kultury szczepu S. aureus do wykorzystania jako kontrola pozytywna. Jako kontrolę negatywną dostępny jest również szczep S. epidermidis.

Ograniczenia

-Dodatniego testu nie należy pozostawiać w inkubacji przez 24 godziny, ponieważ S. aureus wytwarza fibrynolizynę, która rozpuszcza skrzep.

-Do wiarygodnego testu należy użyć świeżego lub świeżo odtworzonego osocza, jak również ważne jest użycie świeżych kultur bakteryjnych (18 do 24 godzin). Pozwala to uniknąć fałszywych negatywów.

-Test należy przeprowadzić razem z kontrolą negatywną i pozytywną.

-Niektóre stałe media mogą wpływać na test koagulazy. Nie zaleca się stosowania kolonii ze słonego agaru z mannitolem.

-Jeśli używane jest osocze z cytrynianem, zaleca się umieszczenie 5 jednostek heparyny na ml osocza, aby uniknąć fałszywie dodatnich wyników. Dzieje się tak, ponieważ niektóre mikroorganizmy inne niż S. aureus mogą rozkładać cytrynian i powodować krzepnięcie osocza. W takim przypadku wskazane jest wykonanie testu Grama i testu katalazy.

- Ważne jest, aby w teście probówkowym monitorować reakcję co 30 minut, ponieważ istnieją szczepy S. aureus, które wytwarzają wysokie stężenia fibrynolizyny i szybko rozcieńczają nowo utworzony skrzep. Unikaj fałszywych negatywów.

-Podczas monitorowania testu należy unikać gwałtownego potrząsania probówką, może to zniszczyć początek tworzenia się skrzepu, który nie zostanie przywrócony później, powodując fałszywie ujemne wyniki.

Bibliografia

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Testy biochemiczne do identyfikacji bakterii o znaczeniu klinicznym. 3rd ed. Od redakcji Panamericana. Buenos Aires. Argentyna.
4. Laboratoria Pro-Lab. Królik koaguluje osocze. Dostępne pod adresem: prolab.com
5. „Koagulaza”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 12 lutego 2019 r., 04:23 UTC. 22 kwietnia 2019, 15:50 wikipedia.org.