Bizmutu siarczyn agar jest stałe średnie i selektywne kultura różnica specjalnie opracowane do izolacji Salmonella enterica podgatunek enterica serotyp Typhi, między innymi, gatunku Salmonella. Podłoże jest znane jako agar BSA ze względu na akronim w angielskim Bismuth Sulfite Agar.
Oryginalna formuła agaru z siarczynem bizmutu została stworzona w 1927 r. Przez Wilsona i Blaira (podłoże z glukozą bizmutu i siarczynem żelaza); zawierał siarczyn sodu, glukozę, roztwór bizmutu, cytrynian amonu, siarczan żelazawy i agar.
Wzrost po 48 godzinach inkubacji Salmonella sp na agarze z siarczynem bizmutu. Źródło: Pixnio.com Autor: Dr. WR Erving, USCDCP
Obecnie istnieje modyfikacja oryginalnego podłoża, składającego się z ekstraktu mięsnego, peptonów mięsnych i kazeinowych, wskaźnika siarczynu bizmutu, glukozy, fosforanu disodu, siarczanu żelazawego, jasnozielonego i agar-agaru.
Istnieje wiele sposobów izolacji gatunków Salmonella, ale jeśli chodzi o odzyskanie serotypu Typhi, agar z siarczynem bizmutu ma nad nimi znaczną przewagę, ponieważ w większości przypadków uzyskuje się bardzo niski lub żaden odzysk tego mikroorganizmu. .
Jednak przy próbie izolacji enteropatogenów konieczne jest użycie więcej niż jednego typu podłoża, ponieważ agar z siarczynem bizmutu jest mniej skuteczny w przypadku innych gatunków Salmonella i rodzaju Shigella, które są zahamowane lub bardzo słabo się rozwijają. w tym agarze.
Należy zauważyć, że ze wszystkich gatunków Salmonella serotyp Typhi jest jednym z najważniejszych enteropatogenów u ludzi i jest jego jedynym rezerwuarem. Ten serowar powoduje dur brzuszny, zapalenie żołądka i jelit, bakteriemię i posocznicę.
Z tego powodu ważne jest, aby uwzględnić ten agar podczas analizy próbek wody, kału lub żywności, w przypadku podejrzenia jego obecności.
Podstawa
Podobnie jak większość podłoży hodowlanych, Bismuth Sulfite Agar zawiera składniki odżywcze sprzyjające rozwojowi bakterii, takie jak peptony i wyciąg z mięsa. Podobnie glukoza pełni funkcję źródła energii i węgla.
Jednak nie wszystkie bakterie będą rosły na tym podłożu, ponieważ podłoże z siarczynem bizmutu jest podłożem selektywnym. Zawiera związki hamujące rozwój mikroorganizmów Gram-dodatnich i niektórych bakterii Gram-ujemnych. Te związki to: wskaźnik, siarczyn bizmutu i jasnozielony.
Ze swojej strony fosforan disodowy utrzymuje osmolarność i pH pożywki.
Dodatkowo agar z siarczynem bizmutu jest pożywką różnicującą dzięki obecności siarczanu żelazawego, który wykazuje tworzenie się H 2 S. H 2 S wytworzony przez bakterie reaguje z siarczanem żelazawym i tworzy wyraźnie widoczny nierozpuszczalny czarny osad.
Wreszcie agar-agar nadaje pożywce stałą konsystencję.
Przygotowanie
Odważyć 52,3 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w jednym litrze wody. Podgrzewać mieszaninę do wrzenia przez 1 minutę, często mieszając, aż do całkowitego rozpuszczenia. Nie przegrzewaj zbyt mocno. To podłoże nie nadaje się do sterylizacji w autoklawie, ponieważ ekstremalne ciepło niszczy podłoże.
Pozostawić do ostygnięcia do 45 ° C i wstrząsnąć przed podaniem na sterylnych szalkach Petriego. Zaleca się wykonywanie płyt o dobrej grubości. Aby to zrobić, do każdego talerza należy wlać 25 ml. Niech zestalą się. Ponieważ jest to podłoże, które nie jest sterylizowane, sugerowane jest jego natychmiastowe użycie.
Jednak badanie przeprowadzone przez D'aousta w 1977 roku wykazało, że istnieje lepsza regeneracja Salmonella typhimurium i Salmonella enteritidis, gdy podłoże agarowe z siarczynem bizmutu starzeje się, nie wpływając na wydajność serowarów Typhi i Paratyphi B.
D'aoust zaleca używanie płytek w 4. dniu chłodzenia, chociaż ostrzega, że wraz z wiekiem selektywność spada, a szczepy Proteus vulgaris rozwijają się łatwiej.
Z tego powodu w przypadku próbek silnie zanieczyszczonych, takich jak kał, zaleca się stosowanie świeżo przygotowanej pożywki. W przeciwnym razie użyć w 4. dniu przygotowania. Inni autorzy zalecają używanie talerzy następnego dnia po ich przygotowaniu, przechowywanych w lodówce.
Schłodzone talerze należy hartować przed użyciem. PH pożywki powinno wynosić 7,5 ± 0,2. Surowe podłoże jest beżowe, a przygotowane podłoże jest zielono-szare i opalizujące.
Aplikacje
Wśród próbek, które można sadzić na tym podłożu, są próbki odchodów, wody pitnej lub ścieków oraz żywności.
W celu ulepszenia izolatów zaleca się przeprowadzenie zabiegu wstępnego wzbogacenia bulionem laktozowym, a po wzbogaceniu bulionem tetrationianowym lub bulionem cystynowo-seleninowym, przed wysiewem na agar z siarczynem bizmutu.
Płytki inkubuje się w temperaturze 35 ° C ± 0,2 przez 24 do 48 godzin w aerobiozie.
Charakterystyka kolonii na agarze z siarczynem bizmutu
Kolonie Salmonella typhi są zwykle widoczne na tym agarze w ciągu 24 godzin z czarnym środkiem i otoczone jasnozieloną obwódką. Natomiast po 48 godzinach stają się całkowicie czarne z powodu tworzenia się siarkowodoru.
-To podłoże hamuje większość gatunków z rodzaju Shigella.
- S. Typhi i S. arizonae mogą dawać bardzo podobne kolonie.
-Bakterie z grupy coli, które wytwarzają H 2 S, takie jak Proteus i Citrobacter, wytwarzają kolonie podobne do kolonii Salmonella, dlatego konieczne jest przeprowadzenie biochemicznych testów identyfikacyjnych.
-Aby uzyskać izolowane kolonie, należy przeprowadzić dobre prążkowanie; Tylko w ten sposób można zaobserwować typowe cechy kolonii z rodzaju Salmonella.
QA
W celu kontroli sterylności niezaszczepioną płytkę inkubuje się w 37 ° C, oczekuje się, że nie będzie wzrostu ani zmiany koloru.
Do kontroli jakości znane szczepy, takie jak:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Oczekuje się, że Escherichia coli i Shigella flexneri będą częściowo hamowane przez rozwój odpowiednio zielonkawo-brązowych i brązowych kolonii. Podczas gdy obie salmonelle muszą mieć doskonały rozwój z czarnymi koloniami z metalicznym połyskiem, a ostatecznie Enterococcus faecalis musi być całkowicie zahamowany.
Bibliografia
- Wilson, W. i EM McV. Blair. Zastosowanie pożywki zawierającej glukozę z siarczynem bizmutu i żelazem do izolacji B. typhosus i B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Pobrane z .jstor.org
- D'aoust JY. Wpływ warunków przechowywania na działanie agaru z siarczynem bizmutu. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Dostępne w: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratoria IVD. Agar z siarczynem bizmutu wg WILSON-BLAIR. 2009. Dostępne pod adresem: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratories. Agar z siarczynem bizmutu. Dostępne pod adresem: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G i Ybarra M. Jakość bakteriologiczna surowego mleka koziego produkowanego w Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45–54