JASNOZIELONY AGAR: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Zieleń brylantowa agar jest pożywce stałej z wysokim stopniem selektywności. Służy wyłącznie do izolacji szczepów z rodzaju Salmonella, jednak istnieją pewne wyjątki, takie jak gatunki typhi i paratyphi, które nie rosną na tym podłożu.

Poszukiwanie rodzaju Salmonella jest częste w próbkach kału, wody lub pożywienia. W tym sensie to medium może być bardzo przydatne. Agar ten został stworzony w 1925 roku przez Kristensena, Lestera i Jurgensa, później został zmodyfikowany przez Kauffmanna.

Jasnozielony agar. Odpowiednio kolonie fermentujące i niefermentujące. Źródło: Wystawa MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Składa się z pluripeptonów z trawiennego trawienia tkanki zwierzęcej i trzustkowego hydrolizatu kazeiny, zawiera także ekstrakt drożdżowy, chlorek sodu, laktozę, sacharozę, czerwień fenolową, jasnozielony i agar-agar.

Charakteryzuje się raczej niegościnnym środowiskiem dla większości bakterii, sprzyjającym rozwojowi Salmonelli, jednak niektóre bakterie z grupy coli mogą w nim przetrwać, słabo się rozwijając.

Należy zauważyć, że rodzaj Shigella nie rośnie na tym podłożu, podobnie jak Salmonella typhimurium ani Salmonella paratyphi. Dlatego jeśli chcesz wyizolować te mikroorganizmy, należy użyć innych podłoży, takich jak między innymi agar XLD.

Podstawa

Jasnozielony agar

Każdy ze składników tworzących podłoże spełnia określoną funkcję, która określa cechy i właściwości agaru.

Pluripeptones i wyciąg z drożdży są źródłem składników odżywczych, z których mikroorganizmy pobierają niezbędny do ich rozwoju azot i minerały. Laktoza i sacharoza to źródła energii dla mikroorganizmów zdolnych do ich fermentacji.

Jasnozielona substancja hamująca rozwój bakterii Gram-dodatnich i dużej liczby mikroorganizmów Gram-ujemnych.

Chlorek sodu zapewnia pożywce stabilność osmotyczną. Podczas gdy czerwień fenolowa jest wskaźnikiem pH, zmienia kolor po wykryciu produkcji kwasu w wyniku fermentacji węglowodanów.

Na tym podłożu rosną niefermentujące kolonie laktozy i sacharozy w kolorze różowawym lub przezroczysto-białym na czerwonym tle. Na przykład bakterie z rodzaju Salmonella.

Podczas gdy bakterie fermentujące laktozę lub sacharozę zdolne do wzrostu na tym podłożu tworzą żółto-zielone lub żółto-zielone kolonie na zielono-żółtym tle. Na przykład Escherichia coli i Klebsiella pneumoniae.

Warianty jasnozielonego agaru (BGA)

Istnieją inne warianty jasnozielonego agaru; Agar z brylantowo-zieloną glukozą (NBG) i nowobiocyną z brylantowo-zieloną glicerolowo-laktozą (NBGL).

Jasnozielony agar glukozowy z nowobiocyną

Zawiera agar sojowy tryptykazowy, cytrynian żelazowo-amonowy, pentahydrat tiosiarczanu sodu, czerwień fenolową, glukozę, jasnozielony, nowobiocynę i wodę destylowaną.

Służy do izolacji kolonii Salmonella z próbek kału.

W tym przypadku jasnozielone i nowobiocyna są substancjami hamującymi, które zapobiegają rozwojowi bakterii Gram-dodatnich i niektórych mikroorganizmów Gram-ujemnych.

Tiosiarczan sodu jest źródłem siarczku, a cytrynian żelazowy jest źródłem żelaza, które są niezbędne do ujawnienia produkcji siarkowodoru poprzez tworzenie się czarnego osadu siarczku żelazowego.

Glukoza jest węglowodanem ulegającym fermentacji, a czerwień fenolowa jest wskaźnikiem pH.

Na tym podłożu kolonie Salmonella rozwijają się jako duże, z czarnym środkiem otoczonym czerwonawą obwódką, po którym następuje wyraźny widoczny obszar. Niektóre szczepy Citrobacter freundii wytwarzają kolonie identyczne jak Salmonella.

Agar z brylantową zielenią nowobiocyny i glicerolowo-laktozą (NBGL)

To podłoże zawiera agar tryptykazowo-sojowy, cytrynian amonu żelaza (III), tiosiarczan sodu, laktozę, glicerol, jasnozielony, nowobiocynę i wodę destylowaną.

Różnica między tą pożywką a poprzednią polega na tym, że glukoza jest zastępowana laktozą i glicerolem, a czerwień fenolowa nie jest używana.

Pożywka jest również używana do izolowania gatunków Salmonella, kolonie stają się czarne z powodu produkcji siarkowodoru.

Tylko kolonie, które nie wytwarzają kwasu z glicerolu lub laktozy, osiągają wystarczającą produkcję H ₂ S, ponieważ niskie pH zakłóca tworzenie H ₂ S. Powoduje to bezbarwne kolonie dla większości gatunków Proteus i Citrobacter.

Przygotowanie

-Zważ 58 gramów komercyjnie otrzymanego odwodnionego podłoża. Dodaj do litra wody redestylowanej. Wymieszaj, odstaw na kilka minut i umieść mieszaninę na źródle ciepła, aż całkowicie się rozpuści.

-Autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut, nie przekraczaj czasu sterylizacji.

-Odstawić i podawać na gorąco na sterylnych szalkach Petriego. Końcowe pH powinno wynosić 6,9 ± 0,2.

- Zestalić i przechowywać w lodówce do czasu użycia. Przed wysianiem płytki powinny mieć temperaturę pokojową.

- Podłoże proszkowe jest koloru zielonego i przygotowane przybiera kolor pomarańczowo-brązowy lub czerwono-zielony, w zależności od pH i firmy handlowej. Bardzo brązowy kolor wskazuje na przegrzanie agaru.

-Gdy agar stwardnieje, nie zaleca się ponownego przerabiania, ponieważ podłoże ulega degradacji.

Zastosowania / aplikacje

Podłoże to służy do wyszukiwania szczepów z rodzaju Salmonella m.in. w próbkach kału i produktach mlecznych.

Ponieważ jest to raczej niegościnne środowisko, zaleca się zasianie obfitego inokulum, jeśli używana jest próbka bezpośrednia. W innym przypadku należy dokonać wstępnego wzbogacenia i wzbogacenia okazów przed wysianiem na tym podłożu.

Ponieważ niektóre szczepy Salmonella są zahamowane lub rosną z trudem, zaleca się, aby do tego podłoża dołączyć inny selektywny agar dla Salmonelli.

Każda kolonia z typową cechą Salmonelli musi zostać poddana testom biochemicznym w celu ostatecznej identyfikacji.

QA

Aby przetestować dobre działanie jasnozielonego podłoża agarowego, można zastosować szczepy ATCC do obserwacji ich rozwoju na nim.

Do najczęściej stosowanych szczepów do kontroli jakości należą: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Pierwsze 3 powinny dać różowawe lub przezroczyste białe kolonie na czerwonym tle. Salmonella z dobrym rozwojem i Proteus z niewielkim lub regularnym wzrostem.

W przypadku Klebsiella i Escherichia spodziewane są żółto-zielone kolonie z żółtym tłem, aw przypadku Shigella i Staphylococcus należy je hamować.

Odwodnione podłoże należy przechowywać w temperaturze pokojowej, w suchym miejscu, ponieważ jest ono bardzo higroskopijne.

Bibliografia

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Jasnozielony agar. 2015.
3. Laboratorium BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. (Wyd. 5). Argentyna, od redakcji Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentyna. Od redakcji Panamericana SA