OLEJEK IMMERSYJNY: SKŁAD, CHARAKTERYSTYKA, ZASTOSOWANIE - BIOLOGIA - 2025

Olejowa jest lepki, klarowny płyn o wysokim współczynniku załamania. Z tego powodu jest szeroko stosowany w obserwacjach mikroskopowych, ponieważ zapewnia zdolność skupiania światła, gdy przechodzi przez obiektyw 100X mikroskopu, zwiększając jego zdolność rozdzielczą.

Dzieje się tak, ponieważ między obiektywem a rozmazem tworzy się lepka warstewka, która zapobiega rozpraszaniu się promieni świetlnych, gdy docierają do powietrza, koncentrując w ten sposób wiązki światła w kierunku próbki.

Zakraplacz z olejkiem immersyjnym i mikroskopem skupionym na obiektywie 100X przy użyciu immersji w olejku. Źródło: Pixabay.com

Olejek immersyjny jest używany tylko z obiektywem 100X. Dlatego obiektyw 100X jest również nazywany obiektywem immersyjnym. Reszta to suche cele. Soczewki tej nie można używać bez olejku immersyjnego, ponieważ bez niego wizualizacja nie byłaby zadowalająca.

Główną funkcją olejku immersyjnego jest zapewnienie jaśniejszych, ostrzejszych i bardziej wyrazistych obrazów, umożliwiając obserwację szczegółów, które w przypadku innych soczewek nie byłyby możliwe.

Pierwszym olejkiem używanym do tego celu był olejek anyżowy, używany razem z pierwszą soczewką immersyjną stworzoną przez Giovanniego Battistę Amici. To tylko zapobiegło aberracji chromatycznej, ale nie zwiększyło apertury numerycznej systemu obiektywów.

Wówczas używano oleju cedrowego, ale miał on wiele wad, które zmuszały go do nieużywania. Wśród nich była wysoka kwasowość, która w krótkim okresie uszkodziła obiektyw.

Następnie używano innych substancji, takich jak woda i gliceryna, aż do powstania syntetycznych olejków immersyjnych, które stopniowo rafinowano, aż dotarły do ​​obecnego olejku immersyjnego, który jest złożonym związkiem substancji organicznych.

Skład olejku immersyjnego

Olejek imersyjny składa się z mieszaniny związków organicznych, takich jak: terfenyl, uwodorniony terfenyl, naturalne węglowodory i polibuteny.

Charakterystyka olejku immersyjnego

Olejowa jest jasnożółtą ciecz, lekko lepki wygląd, o charakterystycznym zapachu, o gęstości od 0,92 do 0,99 g / cm ³ .

Olejek immersyjny nie jest rozpuszczalny w wodzie i ma temperaturę wrzenia 340 ° C. Współczynnik załamania a (n 20 ° C / D): waha się od 1,482 - 1,516. Tymczasem wskaźnik zapłonu wynosi 110 ° C, a lepkość waha się od 100 do 120 mPa.s.

Ten produkt należy odpowiednio utylizować, ponieważ jest ekotoksyczny. Innymi słowy, jest szkodliwy dla środowiska, wpływając głównie na zwierzęta wodne. Z drugiej strony działa drażniąco na skórę i błony śluzowe. W przypadku spożycia działa nefrotoksycznie i kardiotoksycznie.

Olejek immersyjny jest stabilny w temperaturze od 15 do 25 ° C, czyli temperaturze, w której należy go przechowywać.

Podstawy olejku immersyjnego

Używając soczewek o większym powiększeniu, należy zwiększyć intensywność światła. Jednak wiele wiązek światła jest traconych, ponieważ są one rozpraszane, gdy docierają do powietrza (przestrzeń między szkiełkiem nakrywkowym a soczewką), a nawet niektóre promienie są całkowicie odbijane.

Olejek imersyjny ma współczynnik załamania światła podobny do szkła. Dlatego gdy olej wchodzi w kontakt między soczewką 100X a szkiełkiem nakrywkowym, wiązki światła są skoncentrowane.

Skoncentrowane promienie przechodzą przez próbkę i wyostrzają obraz, to znaczy zwiększają aperturę numeryczną obiektywu i korygują aberracje chromatyczne i sferyczne.

Zastosowania lub aplikacje

Stosowanie olejku immersyjnego jest szczególnie potrzebne, gdy konieczne jest szersze obserwowanie obrazu, przy użyciu obiektywu o największym powiększeniu (obiektyw 100X), aby zobaczyć szczegóły niezbędne do postawienia diagnozy.

Dlatego znajduje szerokie zastosowanie w badaniach mikroskopowych w różnych dziedzinach, takich jak: histologia, cytologia, hematologia i bakteriologia. Na przykład jest przydatny do badania cech komórek i tkanek pacjenta.

Służy również do analizy rozmazów krwi, w których chcemy szczegółowo opisać cechy hemopasożytów wewnątrz i na zewnątrz erytrocytów, a także w preparatach Grama, aby określić cechy morfoternistyczne mikroorganizmów.

Zwykle jest stosowany w preparatach utrwalonych, ponieważ nie jest zalecany w preparatach świeżych. Dzieje się tak, ponieważ napięcie powierzchniowe oleju powoduje ruch szkiełka nakrywkowego, co powoduje przesunięcie próbki podczas obserwacji i uniemożliwia analizę.

Z drugiej strony olejek imersyjny jest przydatny nie tylko w konwencjonalnej mikroskopii świetlnej: jest również stosowany w mikroskopach fluorescencyjnych z całkowitym odbiciem wewnętrznym (TIRFM) oraz we fluorescencjach konfokalnych.

Kroki, aby obserwować preparat z użyciem olejku immersyjnego

Aby obejrzeć preparat pod mikroskopem, należy najpierw ustawić ogniskowanie preparatu na najmniejszym powiększeniu, zwykle 10X, przy niskim natężeniu światła.

Następnie trafia do obiektywu 40X, a droga światła jest nieco zwiększona. Niektóre analizy można przeprowadzić przy tym powiększeniu, ale aby zobaczyć szczegóły strukturalne, wymagane jest powiększenie 100X.

Przed przejściem do obiektywu 100X, kroplę olejku immersyjnego umieszcza się na szkiełku nakrywkowym, dokładnie tam, gdzie chcesz obserwować, a następnie przesuwa się głowicę mikroskopu, aby zlokalizować obiektyw 100x w preparacie.

Intensywność światła jest regulowana (zwiększana) (poprzez przesuwanie kondensora i otwieranie przysłony). Następnie kilkoma drobnymi ruchami śruby mikrometrycznej (do przodu lub do tyłu) należy ustawić ostrość idealnie, jeśli mikroskop używa obiektywów parafokalnych.

Jeśli spróbujesz skupić preparat bezpośrednio za pomocą soczewki immersyjnej, możesz mieć problem ze znalezieniem ostrości. Nie jest to akcja niemożliwa, ale trudność znacznie wzrasta.

Opieka

Aby używać olejku immersyjnego, należy wziąć pod uwagę określone warunki.

Po przygotowaniu barwnego preparatu, takiego jak rozmaz zabarwiony Giemsą lub Gramem, należy poczekać, aż rozmaz całkowicie wyschnie, zanim zostanie zanurzony w olejku. W przeciwnym razie olejek razem z wodą utworzy micele, które nie pozwolą zobaczyć preparatu.

Z drugiej strony, po obejrzeniu partii preparatów, czyli na koniec dnia roboczego, obiektyw 100X należy dokładnie wyczyścić papierem do soczewek z etanolem. Jeśli soczewka zostanie zabrudzona, olej wyschnie na niej i wtedy będzie bardzo trudno go usunąć, uszkadzając pole widzenia.

Należy również wziąć pod uwagę, że olej jest łatwopalny i należy go trzymać z dala od źródeł ciepła (zapalniczek). Ważne jest, aby unikać podgrzewania go powyżej 65 ° C.

Wreszcie olej jest produktem toksycznym. Dlatego należy unikać bezpośredniego kontaktu ze skórą i błonami śluzowymi, ponieważ może to spowodować lekkie podrażnienie. Aby uniknąć wypadków, do obsługi zaleca się używanie rękawic i okularów ochronnych.

W przypadku kontaktu z olejem miejsce to należy umyć dużą ilością wody. Jeśli olej dostanie się do oczu, należy je umyć w ten sam sposób, trzymając oczy otwarte. W przypadku przypadkowego połknięcia ważne jest, aby oprócz udania się do najbliższego lekarza wypić ciepłą wodę i wywołać wymioty.

Bibliografia

1. „Mikroskop fluorescencyjny całkowitego wewnętrznego odbicia”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 30 grudnia 2018, 22:46 UTC. 14 maja 2019, 01:54
2. IVD. Mikroskopia Zanurzenie w olejku. Dostępne pod adresem: Users / Team / Downloads.
3. Biologia środowiska i mikrobiologia. Działanie mikroskopu optycznego. Dostępne pod adresem: eumed.net/libros.
4. Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. Historia mikroskopu i jego wpływ na mikrobiologię. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. Dostępne w: scielo.
5. Herrero J. Praktyka nr 1: Podstawy i zastosowanie wspólnego mikroskopu optycznego. Universitat d´Alacant Dostępne pod adresem: rua.ua.es/dspace
6. Scharlau - MSDS. Olejek immersyjny do mikroskopii. 2001. Dostępne pod adresem: insumos-labcentral.