AGAR BHI: PODKŁAD, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2025

Agar BHI lub Brain Heart Infusion Agar Medium jest zasobna kultura stały. W języku hiszpańskim nazywamy go agarem infuzyjnym mózgu i serca. Jest to nieselektywne podłoże hodowlane, co oznacza, że ​​mogą rozwijać się wszystkie typy bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych, a także niektóre drożdże i grzyby strzępkowe.

Składa się z wlewu z mózgu i serca cielęcego, hydrolizatu peptydowego z tkanek zwierzęcych, trzustkowego hydrolizatu kazeiny, chlorku sodu, glukozy, fosforanu disodu i agaru.

Płyty BHI. Źródło: Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa Gil.

Należy zauważyć, że agar BHI jest jednym z najczęściej stosowanych podłoży hodowlanych w laboratoriach bakteriologicznych. Może być stosowany bez dodatków jako hodowla pierwotna, subkultura kolonii uzyskana na innych pożywkach selekcyjnych lub do utrzymania szczepów w laboratorium.

Z drugiej strony jest to idealne podłoże do wykorzystania jako baza do przygotowania wzbogaconych podłoży, takich jak agar z krwią i agar czekoladowy. Obie są idealne do izolacji wymagających mikroorganizmów z żywieniowego punktu widzenia. Należy jednak zauważyć, że ponieważ zawiera glukozę, nie nadaje się do obserwacji wzorców hemolizy.

Podobnie agar BHI można wykorzystać do przygotowania specjalnych podłoży do izolacji trudnych w uprawie drobnoustrojów chorobotwórczych na zwykłych podłożach, m.in .: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae i Histoplasma capsulatum.

Z dodatkiem antybiotyku agar BHI staje się selektywnym podłożem do izolacji grzybów.

Podstawa

Jest to pożywna pożywka hodowlana do izolowania średnio wymagających mikroorganizmów, a jej wzbogacenie można zwiększyć poprzez dodanie krwi i innych suplementów diety.

Jest to podłoże nieselektywne, dlatego umożliwia wzrost większości bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych, a także niektórych grzybów. Można go jednak uczynić selektywnym przez dodanie antybiotyków.

Pożywka zawiera wlew z mózgu i serca cielęcia, hydrolizat peptydowy tkanek zwierzęcych i trzustkowy hydrolizat kazeiny; Wszystkie te związki działają jako źródła witamin, aminokwasów, azotu i węgla.

Glukoza to węglowodan, który dostarcza energię mikroorganizmom po jej sfermentowaniu. Tymczasem chlorek sodu i fosforan disodu utrzymują równowagę osmotyczną i zapewniają pH bliskie neutralności. Wreszcie agar nadaje średnio stałą konsystencję.

Przygotowanie

Odważyć 52 gramy odwodnionej pożywki i rozpuścić w jednym litrze wody destylowanej. Doprowadzić mieszaninę do źródła ciepła do wrzenia, często mieszając podczas procesu rozpuszczania.

Płytki lub kliny agarowe BHI można przygotować bez dodatków.

Kliny

Aby przygotować kliny, podawaj preparat do napełnienia połowy każdej probówki, przykryj i sterylizuj w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut, po pozostawieniu położyć na podłożu do zestalenia. Później przechowywać w lodówce do czasu użycia.

Kliny BHI dla Bacterioteca. Źródło: Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa Gil.

Talerze

Rozpuszczoną mieszaninę autoklawuje się w 121 ° C przez 15 minut, po pozostawieniu pozostawia do ostygnięcia do 50 ° C i 20 ml pożywki podaje się na sterylne szalki Petriego. Pozostawia się je do zestalenia, odwraca się i przechowuje w lodówce do czasu użycia. Przed wysianiem pozwól płytkom osiągnąć temperaturę pokojową.

Wartość pH pożywki musi pozostać na poziomie 7,4 ± 0,2.

Surowe podłoże jest koloru beżowego, a przygotowane podłoże ma kolor jasno bursztynowy.

Przygotowanie agaru z krwią

Po wysterylizowaniu pożywki schłodzić do temperatury około 45–50 ° C, następnie dodać krew (50 ml), delikatnie wymieszać w celu ujednorodnienia i aseptycznie podać 20 ml na każdą szalkę Petriego. Jeśli na płycie utworzą się bąbelki, jaśniejszy płomień należy szybko przepuścić nad bąbelkami, aby je wyeliminować.

Podobnie można przygotować specjalne media, dodając odpowiednie dodatki, gdy mieszanina osiągnie temperaturę 45 do 50 ° C.

Pożywka pozostaje wiśniowo-czerwona.

Aplikacje

Stosować bez dodatków

Agar BHI bez dodatków jest przydatny jako kultura pierwotna oraz do wysiewu czystych szczepów drobnoustrojów o niskich lub średnich wymaganiach w celu ich późniejszej identyfikacji.

Ponieważ jest to podłoże o jasnym zabarwieniu, jest idealne do obserwacji pigmentów, a ponieważ nie zawiera substancji interferujących, można na nim przeprowadzić niektóre testy biochemiczne, takie jak oksydaza i katalaza, lub inne testy biochemiczne z kolonii z tego agar.

Podobnie, kliny agarowe BHI są szeroko stosowane do utrzymania szczepów przez określony czas w laboratorium (bakterioteca).

Płytki lub kliny wysiane na powierzchni szczepami bakteryjnymi inkubuje się w 37 ° C przez 24 do 48 godzin. Tymczasem w przypadku grzybów temperatura i czas inkubacji będą zależały od rodzaju poszukiwanego grzyba.

Jako podłoże bazowe do przygotowania innych podłoży

Na tej bazie można przygotować pożywki wzbogacone i selektywne.

Wzbogacony

Jego główną funkcją jest służenie jako podstawa do przygotowania agaru z krwią do rutynowego stosowania w laboratoriach mikrobiologicznych. Szczególnie baza BHI sprzyja izolacji Streptococcus sp. Jednak ma tę wadę, że nie nadaje się do obserwacji wzorców hemolizy, ponieważ zawiera glukozę.

Stosuje się go również do przygotowania agaru z krwią królika lub konia do izolacji Haemophilus sp. Aby uzyskać najlepsze wyniki, można dodać suplement wzbogacający (IsoVitaleX).

Jeśli próbki pochodzą z dróg oddechowych, do agaru można dodać bacytracynę w celu zahamowania towarzyszącej flory i zwiększenia prawdopodobieństwa wyzdrowienia Haemophilus sp.

Alternatywnie, do izolacji Corynebacterium diphtheriae można przygotować agar z krwią (jagnięcą lub ludzką) z tellurynem cystyny. Podobnie, przydatne jest przygotowanie agaru z krwią królika, z dodatkiem cystyny ​​i glukozy w celu izolacji Francisella tularensis.

Szczepienie krwi płytkach agarowych odbywa zmęczenia i inkubuje się w temperaturze 35-37 ° C przez 24-48 godzin w microaerophilicity (5-10% CO ₂ ).

Selektywny

To podłoże z dodatkiem antybiotyków może zastąpić agar Sabourauda do izolacji grzybów.

Połączenie agaru BHI z chloramfenikolem - gentamycyną lub penicyliną -, streptomycyną i końską krwią jest idealne do izolacji Histoplasma capsulatum.

W zależności od mikroorganizmu, który ma być izolowany, zaleca się inkubację w temperaturze 35-37 ° C lub w temperaturze pokojowej w warunkach tlenowych. Czasami konieczna jest inkubacja w obu zakresach temperatur, przy użyciu do tego 2 płytek.

Niektóre grzyby, takie jak Trichophyton mentagrophytes, należy inkubować w temperaturze pokojowej do 7 dni.

QA

Z każdej przygotowanej partii zaleca się inkubację 1 płytki lub klina w 37 ° C przez 24 godziny i sprawdzenie, czy nie ma wzrostu; Jest to szczególnie ważne przy przygotowywaniu agaru z krwią, ponieważ jest to podłoże łatwo ulegające skażeniu.

Z drugiej strony jakość pożywki można ocenić, zaszczepiając znane lub certyfikowane szczepy standardowe i obserwując ich rozwój.

W tym sensie do oceny agaru BHI bez dodatków można zastosować szczepy Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 lub Candida albicans ATCC 10231. Inkubuje się je w temperaturze 37 ° C w warunkach tlenowych przez 24 do 48 godzin. We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego wzrostu.

Szczepy Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 lub Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 można wysiewać w celu oceny płytek agarowych z krwią.

Szczepy bakteryjne inkubuje się w temperaturze 37 ° C w warunkach mikroaerofilności przez 24 godziny, natomiast grzyby inkubuje się w temperaturze pokojowej w wilgotnej komorze do 7 dni. We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego wzrostu.

Bibliografia

1. Britannia Laboratories. Agar z infuzją mózgu i serca. 2015. Dostępne pod adresem: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013 Dostępne na: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Agar do infuzji mózgu i serca. 2009.
4. Neogen Laboratory. Agar z infuzją mózgu i serca. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
5. Agar Gil M. Blood: podkład, zastosowania i przygotowanie. Dostępne pod adresem: lifeder.com.
6. Współtwórcy Wikipedii. Napar z serca mózgu. Wikipedia, wolna encyklopedia. 19 września 2018, 03:58 UTC. Dostępne pod adresem: wikipedia.org. Dostęp 2 marca 2019 r.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.