Agar Biggy jest stałe średnie i selektywne kultura różnicowego. Został zaprojektowany, aby izolować i pomóc w identyfikacji głównych gatunków Candida. Jego nazwa BIGGY pochodzi od angielskiego akronimu Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Oryginalną formułę stworzył Nickerson, dlatego podłoże to znane jest również jako agar Nickerson. Obecnie zawiera ekstrakt drożdżowy, glicynę, dekstrozę, cytrynian amonu, cytrynian bizmutu, siarczyn sodu i agar.
Graficzne przedstawienie agaru BIGGY. Źródło: Flickr.com
BIGGY agar został opracowany w celu różnicowania gatunków Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei i C. kefyr, ale rosną również inne gatunki, takie jak Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum i Saccharomyces cerevisiae.
Charakteryzuje się dobrą czułością i specyficznością, jednak w porównaniu z innymi pożywkami o podobnej funkcji plasuje się na drugim miejscu, wyprzedzając CHROMagar. Z tego powodu wiele laboratoriów preferuje ten drugi, chociaż jest on znacznie droższy.
Powinno być jasne, że użycie agaru BIGGY, a także innych podobnych środków, pomaga w szybkiej, przypuszczalnej identyfikacji, ale nigdy do potwierdzenia. Dlatego muszą być dostępne dodatkowe metody identyfikacji; na przykład systemy identyfikacji Vitek 32 i API 20.
Podstawa
Agar BiGGY jest uważany za częściowo selektywne podłoże do izolacji drożdży, zwłaszcza z rodzaju Candida, chociaż inne rodzaje mogą rosnąć.
Jest to również podłoże zróżnicowane, ponieważ w zależności od gatunku będą obserwowane różne cechy pod względem wyglądu, koloru, kształtu i wielkości. Jest uważane za podłoże chromogenne ze względu na rozwój różnych kolorów w koloniach.
Kolor kolonii drożdży wynika z obecności siarczynu bizmutu w agarze. Nickerson zdał sobie sprawę, że drożdże z rodzaju Candida dokonują zewnątrzkomórkowej redukcji siarczynu bizmutu, przekształcając go w siarczek bizmutu (nierozpuszczalną czarną substancję). Powoduje to powstawanie kolonii od jasnobrązowych do czarnych.
Ten agar zawiera wyciąg z drożdży i dekstrozę, które są źródłem podstawowych składników odżywczych i energii dla rozwoju drożdży. Glicyna jest stymulantem wzrostu drożdży, a jednocześnie hamuje wzrost niektórych bakterii.
W tym samym sensie cytrynian amonu i bizmutu, a także siarczyn sodu działają jako inhibitory wzrostu bakterii. Agar jest środkiem nadającym średnio stałą konsystencję.
Przygotowanie
Odważyć 45 g odwodnionej pożywki hodowlanej i rozpuścić w litrze wody destylowanej. Wstrząsnąć i podgrzać mieszaninę, gotując przez 1 minutę do całkowitego rozpuszczenia. Ta pożywka hodowlana nie nadaje się do sterylizacji w autoklawie.
Po schłodzeniu do około 45 ° C w łaźni wodnej przelać 20 ml na sterylne szalki Petriego.
Odwodnione podłoże ma kolor żółtawoszary i jest żółtawobiałym żelem, w którym można zaobserwować lekko kłaczkujący osad.
Wartość pH powinna wynosić 6,8 ± 0,2.
Przygotowaną pożywkę należy przechowywać w lodówce (4 ° C) i chronić przed światłem. Ponieważ jest to podłoże, którego nie można sterylizować w autoklawie, należy je jak najszybciej użyć. Zaleca się jego stosowanie przed 3 dniami po przygotowaniu.
Posługiwać się
Płytki inkubuje się w temperaturze pokojowej (25 ° C) przez 24, 48 i 72 godziny, a czas inkubacji można wydłużyć do 5 dni.
Każdy gatunek Candida ma pewne cechy, które odróżniają je od innych. Producenci podłoża opisują następujące cechy dla każdego gatunku:
- Kompleks Candida albicans: rozwija się na tym agarze w postaci gładkich, okrągłych, brązowych lub czarnych kolonii z lekkim obramowaniem grzybni. Z wyjątkiem tego, że ciemny kolor nie rozprasza się do środka.
-Candida tropicalis: jasne, małe, ciemnobrązowe kolonie z czarnym środkiem i niewielką obwódką grzybni. Ciemny kolor rozprzestrzenia się w kierunku środka, co jest charakterystyczne dla tego gatunku, po inkubacji przez 72 godziny.
-Candida krusei tworzy duże, płaskie, szorstko wyglądające kolonie z brązową lub czarnawą obwódką.
-Candida parakrusei: kolonie średniej wielkości, przeważnie szorstkie, płaskie. Kolor może wahać się od jasnego ciemno czerwono-brązowego do jasno czerwonawo-brązowego. Na granicy kolonii rozległa, żółtawa grzybnia.
-Candida stellatoidea: tworzy średnie, płaskie kolonie, ciemnobrązowe, prawie czarne. Rozwój grzybni jest bardzo rzadki.
Badanie przeprowadzone przez Yücesoy i Marol w 2003 roku wykazało, że podłoże CHROMagar ma lepszą czułość i specyficzność w różnicowaniu i identyfikacji różnych gatunków Candida niż agar BIGGY.
QA
W celu kontroli jałowości niezaszczepione płytki inkubuje się w temperaturze 25 ° C w ciemności przez 24 do 48 godzin, przy czym oczekuje się, że nie dojdzie do jakiegokolwiek wzrostu ani zmiany koloru.
Szczepy ATCC zalecane do kontroli jakości pożywki to:
Candida albicans ATCC 60193 kompleks, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. We wszystkich z nich oczekuje się wzrostu, jak opisano powyżej.
Można również użyć następujących szczepów:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 i Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. W pierwszych dwóch spodziewane jest całkowite zahamowanie, ale w przypadku częściowego wzrostu kolonie będą miały kolor kremowy.
W przypadku S. aureus spodziewane jest całkowite zahamowanie wzrostu, ale jeśli rośnie częściowo, jego kolonie są białe.
Ograniczenia
Niektóre bakterie są zdolne do wzrostu w tym podłożu i mogą nawet zmienić kolor na ciemny, symulując kolonię Candida, ale podczas rozmazania kolonii i obserwacji pod mikroskopem można ją łatwo wyrzucić.
Tabela: Charakterystyka kolonii niektórych drożdży na agarze BIGGY na podstawie pracy Yücesoy M i Marol S.
Źródło: Yücesoy M, Marol S. Wydajność agaru CHROMAGAR candida i BIGGY do identyfikacji gatunków drożdży. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Bibliografia
- Yücesoy M, Marol S. Performance of CHROMAGAR candida i BIGGY agar do identyfikacji gatunków drożdży. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Karta techniczna BIGGY Agar. Dostępne pod adresem: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. BIGGY agar. Dostępne pod adresem: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011 Dostępne na: bd.com