AGAR Z ŻÓŁCIĄ I ESKULINĄ: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2025

Żółciowych eskulina agar jest selektywne i kultura różnica pożywce. Jest stosowany jako test diagnostyczny do określenia zdolności określonego mikroorganizmu do wzrostu w pożywce zawierającej żółć, a także do rozkładu eskuliny glukozydowej na eskuletynę i glukozę.

Ten test diagnostyczny służy do różnicowania gatunków z rodzaju Streptococcus należących do grupy D (dodatnia żółć eskulina) od innych grup Streptococcus, które reagują negatywnie na ten test.

Płytka z agarem z żółcią i eskuliną, zaszczepiona szczepem Enterococcus (dodatni wynik testu). Źródło: nie podano autora do odczytu maszynowego. Założono Philippinjl (na podstawie roszczeń dotyczących praw autorskich).

Należy zauważyć, że niektóre Streptococcus z grupy viridans mogą hydrolizować eskulinę, ale nie są zdolne do wzrostu w obecności żółci w stężeniu 40%, dlatego w tym podłożu reakcja dla tej grupy jest ujemna.

Z drugiej strony, pożywka z eskuliną żółciową jest również przydatna do diagnozowania gatunków Listeria monocytogenes lub Aerococcus sp, ponieważ te mikroorganizmy są dodatnie dla żółci eskuliny.

Esculin Bile Agar składa się z peptonu, ekstraktu mięsnego, żółci wołowej, eskuliny, cytrynianu żelaza, agaru i wody destylowanej. Niektóre domy handlowe zawierają azydek sodu w składzie pożywki.

Pożywkę można przygotować w laboratorium, jeśli wszystkie związki są dostępne oddzielnie, lub można ją przygotować z odwodnionej pożywki handlowej.

Podstawa

Pożywka z żółcią eskuliny zawiera peptony i wyciąg z mięsa, oba te związki dostarczają niezbędnych składników odżywczych do wzrostu mikroorganizmów.

Zawiera również eskulinę; Związek ten jest glukozydem utworzonym przez połączenie prostego monosacharydu (glukozy) ze związkiem zwanym 6,7-dihydroksykumaryną lub eskuletyną (aglukonem), połączonym wiązaniem acetalowym lub glukozydowym.

Test polega na wykazaniu, czy bakteria jest zdolna do hydrolizy eskuliny. W takim przypadku eskulina rozpada się na eskuletynę i glukozę. Esculetina reaguje z żelazem obecnym w podłożu, tworząc ciemnobrązowy, prawie czarny związek.

Oznacza to, że cytrynian żelazowy działa jako wywoływacz reakcji. Ta cecha sprawia, że ​​Bile Esculin Agar jest podłożem różnicującym.

Ze swojej strony żółć jest inhibitorem, który zapobiega rozwojowi niektórych mikroorganizmów, dlatego bakteria przed rozszczepieniem eskuliny musi być zdolna do wzrostu w obecności żółci. Dlatego to podłoże jest uważane za selektywne.

Bakterie, które mogą rozwijać się w tym środowisku, to głównie te, które żyją w środowisku jelitowym.

W tym sensie niektóre firmy komercyjne dodają azydek sodu do pożywki, aby dodatkowo zahamować wzrost jelitowych pałeczek Gram-ujemnych, zwiększając selektywność pożywki dla wzrostu Streptococcus.

Wreszcie agar nadaje pożywce stałą konsystencję, a rozpuszczalnikiem związków jest woda.

Przygotowanie

Domowe przygotowanie agaru z żółcią i eskuliną

Ważyć:

5 g peptonów

3 g ekstraktu mięsnego

40 g żółci wołowej

1 g eskuliny

0,5 g cytrynianu żelaza

15 g agaru

1000 ml wody destylowanej

W przypadku dodania azydku sodu odważa się 0,25 g / litr i dodaje do mieszaniny.

Rozpuścić składniki w litrze wody destylowanej, podgrzewać do całkowitego rozpuszczenia związków. Rozprowadzić 5 ml do probówek z zakrętkami 16 x 125 mm. Autoklawuj w 121 ° C, pod ciśnieniem 15 funtów przez 15 minut.

Wyjąć z autoklawu i przechylić probówki na podstawce, tak aby agar zestalił się w szerokim, rowkowanym dziobie.

Przed użyciem przechowywać w lodówce. Przed siewem doprowadzić do temperatury pokojowej.

Można również przygotować płytki z agarem z żółcią i eskuliną; w tym przypadku cała mieszanina jest autoklawowana w kolbie, a następnie rozprowadzana na sterylnych płytkach Petriego. Niech zestalą się i przechowuj w lodówce.

PH pożywki musi wynosić 6,6 ± 0,2.

Przygotowanie agaru z żółcią i eskuliną z komercyjnej pożywki

Zważyć ilość określoną przez wkładkę. Może się to różnić w zależności od domu biznesowego. Następnie postępuj zgodnie z procedurą opisaną powyżej.

PH pożywki powinno wynosić 6,6 ± 0,2. Odwodnione podłoże ma kolor jasnobeżowy, a przygotowane podłoże jest ciemnobursztynowe.

Handlowe podłoże z eskuliną żółciową. Źródło: Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa Gil.

Aplikacje

Pożywka zawierająca eskulinę żółci jest używana głównie do odróżnienia Streptococcus grupy D (dodatnia żółć eskulina) od pozostałych grup Streptococcus (ujemna żółć eskuliny).

Połączenie testu wzrostu w bulionie z hipersolą z testem eskuliny żółciowej pozwala zidentyfikować specjalną grupę paciorkowców z grupy D zwaną Enterococcus.

Ta szczególna grupa Streptococcus należy do grupy D wspomnianego rodzaju i są one zdolne do hydrolizy eskuliny w obecności żółci, podobnie jak reszta przedstawicieli grupy D, ale są również zdolne do rozwoju w pożywce hipersolonej (BHI z chlorkiem 6,5% sodu), właściwość, która robi różnicę.

Dlatego paciorkowce, które hydrolizują żółć eskuliny, ale nie rosną w przesolonym bulionie, są nazywane nie-enterokokami grupy D.

Posiany

Pożywkę zaszczepić najlepiej czystym 24-godzinnym bulionem Todd-Hewitt.

Dodać 2 krople na powierzchnię podłoża za pomocą pipety Pasteura i rozprowadzić po podłożu za pomocą platynowej pętli.

Inkubować w temperaturze 35 ° C przez 48 godzin, dopóki czas inkubacji jest dotrzymany, można go monitorować, aby sprawdzić, czy nastąpiła pozytywna reakcja. Jeśli pod koniec czasu reakcja pozostanie ujemna, można ją inkubować do 72 godzin.

Interpretacja

Reakcja pozytywna : pojawienie się ciemnobrązowego, prawie czarnego koloru na dziobie fletu (w przypadku testu probówkowego) lub czernienie agaru wokół kolonii (w przypadku testu płytkowego).

Reakcja negatywna : po 72 godzinach inkubacji pożywka nie czernieje lub w mniej niż połowie probówki pojawia się czarny wygląd. Z drugiej strony wzrost bakterii w pożywce bez pojawienia się czarnego koloru należy uznać za test ujemny.

QA

Aby ocenić jakość pożywki, szczep Enterococcus faecalis ATCC 29212 musi być dostępny jako kontrola pozytywna, a szczep Streptocococus nienależący do grupy D jako kontrola negatywna.

Ograniczenia

-Środki niezawierające azydku sodu pozwalają na rozwój jelitowych pałeczek Gram-ujemnych. Niektóre z nich mogą zaczernić środek.

- Niektóre domy komercyjne dodają niskie stężenie żółci (10%) iz tego powodu niektóre Streptococcus nienależące do grupy D mogą rozwijać się w pożywce i hydrolizować eskulinę, co może powodować błędy w interpretacji.

Bibliografia

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Testy biochemiczne do identyfikacji bakterii o znaczeniu klinicznym. 3rd ed. Od redakcji Panamericana. Buenos Aires. Argentyna.
4. Lab. Britannia. Żółć eskuliny z agarem azydkowym. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
5. „Bile Esculin Agar”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 22 sierpnia 2017 r., 17:30 UTC. 22 kwietnia 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015 Dostępne na: bd.com
7. Neogen Laboratories. Agar z żółcią i eskuliną. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com