AGAR CZEKOLADOWY: PODSTAWA, ZASTOSOWANIA I PRZYGOTOWANIE - BIOLOGIA - 2026

Agar czekoladowy jest pożywce stałej, wzbogacone nie - selektywna i nie - różnicowego. Służy głównie do izolacji mikroorganizmów wymagających żywieniowo, chociaż może w nim rosnąć każdy rodzaj bakterii.

Z tego powodu jego przydatność wzrasta, szczególnie w przypadku wysiewu próbek, które są normalnie sterylne, takich jak płyn mózgowo-rdzeniowy i płyn stawowy. Chociaż jest to również zawarte w wybranych środkach do wysiewu próbek drobnoustrojów, ale w takich przypadkach konieczne jest dodanie antybiotyków, które hamują współistniejącą florę.

Agar czekoladowy ze wzrostem bakterii

To medium ma charakterystyczny brązowy kolor bardzo podobny do czekolady, stąd jego nazwa. Preparat jest bardzo podobny do agaru z krwią, tyle że w tym przypadku krew musi zostać podgrzana, aby krwinki czerwone uległy rozpadowi.

Jego przygotowanie, podobnie jak agar z krwią, jest bardzo delikatne, ponieważ łatwo ulega zanieczyszczeniu. Z tego powodu wiele laboratoriów woli nabywać to podłoże przygotowane już przez firmy komercyjne, które gwarantują jego jakość.

Podstawa

Podłoże składa się z bogatego w składniki odżywcze podłoża agarowego i podgrzanej krwi. Hemoliza krwinek czerwonych dostarcza czynnik X (hemina) i czynnik V (NAD), niezbędne do wzrostu niektórych mikroorganizmów, takich jak rodzaj Haemophilus. Jest również bardzo przydatny do izolacji Neisserias sp.

Podobnie jak agar z krwią, w zależności od potrzeb jako podłoże bazowe można stosować różne podłoża. Wśród zastosowanych podłoży znajdują się wlew do mózgu z sercem i agar z tryptykazą sojową, chociaż najbardziej zalecane są agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar i Thayer Martin agar.

Niektóre warianty agaru czekoladowego obejmują dostępny w handlu wzmocniony suplement o nazwie Isovitalex lub Polivitex.

Te suplementy zawierają witaminę B ₁₂ , L-glutaminę, adeninę, chlorowodorek guaniny, kwas p-aminobenzoesowy, dinukleotyd nikotynamidoadeninowy (NAD), pirofosforan tiaminy, azotan żelaza, chlorowodorek tiaminy, chlorowodorek cysteiny, L-cystynę i glukozę.

Należy zauważyć, że agar czekoladowy jest bardziej wzbogacony niż agar z krwią, ale nie pozwala na obserwację wzorców hemolizy.

Aplikacje

Źródło: pixnio.com. Autor:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, dr Todd Parker, Audra Marsh, USCDCP

Agar czekoladowy przygotowany z agarem Columbia

To podłoże zawiera trzustkowy hydrolizat kazeiny i serca, trawienny hydrolizat mięsa, chlorek sodu, agar, ekstrakt drożdżowy i skrobię kukurydzianą. Jest również bogaty w witaminy, minerały i niezbędne aminokwasy.

Ta podgrzana baza krwi jest idealna do izolacji bakterii z rodzaju Neisseria. Z drugiej strony, jeśli do pożywki doda się dodatkowo suplement dla Brucelli, wspomniany mikroorganizm można wyizolować. Wyniki są lepsze dzięki krwi końskiej.

Agar czekoladowy przygotowany na bazie agaru GC (dla gonokoków)

To podłoże zawiera peptony, skrobię kukurydzianą, bufory jednozasadowe i dwuzasadowe, chlorek sodu i agar.

Większość komercyjnie przygotowanych agarów czekoladowych zawiera tę bazę i nie zawiera podgrzanej krwi, ale raczej syntetyczną mieszankę heminy i chemicznego dodatku czynników wzrostu, witamin, minerałów, aminokwasów, czynnika V i glukozy.

Agar czekoladowy przygotowany z agarem Müeller Hinton

Służy do badania wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe wymagających drobnoustrojów, takich jak Streptococcus pneumoniae, przy użyciu 5% podgrzanej krwi baraniej.

Służy również do pierwotnej izolacji Neisserias i Haemophilus, ale w szczególnym przypadku izolacji Haemophilus preferowane jest użycie krwi końskiej, ponieważ jest ona bogatym źródłem czynnika X i V.

Z drugiej strony, jeśli próbka do wysiewu pochodzi z niesterylnego obszaru, zaleca się dodanie antybiotyków w celu zahamowania normalnej flory tego obszaru.

Przykład próbek z dróg oddechowych, w których podejrzewa się obecność bakterii z rodzaju Haemophilus, bacytracyna jest stosowana w celu zahamowania wzrostu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus i Neisserias saprofitycznych.

W przypadku próbek wrzodów narządów płciowych, u których podejrzewa się Haemophilus ducreyi, z powodzeniem zastosowano agar czekoladowy przygotowany w następujący sposób: agar Müeller - Hinton z 5% czekoladowaną krwią końską, 1% wzbogaceniem Isovitalex i 3 µg / ml wankomycyny.

Agar czekoladowy przygotowany z agarem Thayer Martin

To podłoże jest specjalne do izolacji Neisseria gonorrhoeae. Musi zawierać antybiotyki, aby hamować towarzyszącą florę. Używana jest krew jagnięca.

Przygotowanie

Powinieneś zobaczyć wskazówki dotyczące przygotowania podstawowego agaru do użycia. Znajdują się z tyłu pojemnika z odwodnioną pożywką. Ogólnie opisują, ile należy ważyć, aby przygotować litr pożywki.

Dokładną potrzebną ilość można przygotować w laboratorium, może wynosić mniej lub więcej niż litr.

Obliczenia

Do obliczenia, ile ważyć, aby przygotować żądaną objętość, stosuje się regułę trzech. Przykład:

Jeśli na 1 litr trzeba zważyć 40 gr, a laboratorium wymaga 800 ml, mówi się:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formuła będzie następująca:

X = 32 gr (ilość do zważenia na 800 ml).

Zważyć i rozpuścić

Niezbędną ilość waży się i umieszcza w kolbie z wodą.

Podgrzej na umiarkowanym ogniu i delikatnie mieszaj ruchami obrotowymi, aż odwodniona pożywka całkowicie się rozpuści, gotując przez 1 minutę.

Sterylizować

Kolbę umieszcza się w autoklawie w celu sterylizacji pożywki w 121 ° C przez 20 minut.

Agregat krwi

Opuszczając autoklaw, należy odstawić, aż temperatura pożywki osiągnie w przybliżeniu między 56 a 70 ° C, aby umieścić krew i mieszać, aż podłoże stanie się brązowe.

Jeśli dodajesz suplementy, to jest czas, aby to zrobić. Następnie wymieszaj i podawaj 20 ml na każdą sterylną szalkę Petriego.

Cała procedura powinna być wykonana pod osłoną z przepływem laminarnym lub wokół palnika Bunsena.

Odstawić do zestalenia i przechowywać w lodówce odwróconą.

Inny sposób na przygotowanie agaru czekoladowego bez użycia krwi

Pożywkę podstawową przygotowuje się w sposób opisany powyżej, a uzyskaną w handlu odwodnioną hemoglobinę rozpuszcza się i sterylizuje w autoklawie.

Oba roztwory pozostawia się do ostygnięcia do 50 ° C, łączy się i dodaje suplement. Wymieszać w warunkach aseptycznych, a następnie podawać na sterylnych szalkach Petriego.

QA

Ważne jest, aby krew była umieszczona we wskazanej temperaturze, ponieważ jest ona idealna do lizy czerwonych krwinek, a jednocześnie utrzymuje czynnik V, który jest wrażliwy na ciepło.

Na powierzchni agaru nie powinny pozostać żadne bąbelki. Z każdej partii 100 płytek jedną lub dwie płytki należy inkubować w piecu w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w celu sprawdzenia ich sterylności.

Aby uzyskać najlepsze rezultaty, agar czekoladowy należy użyć wkrótce po przygotowaniu.

Kontrolne szczepy bakteryjne należy przechowywać w laboratorium w celu oceny skuteczności świeżej pożywki dla wzrostu głównych drobnoustrojów o wysokich wymaganiach odżywczych o znaczeniu klinicznym.

Bibliografia

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Serwis Publikacji UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna. Od redakcji Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. (Wyd. 5). Argentyna, od redakcji Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Możliwość użycia podłoża hodowlanego GC-Biocen Agar w Laboratorium Mikrobiologicznym. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Dostępne pod adresem: scielo.sld.
5. Współtwórcy Wikipedii. Agar czekoladowy. Wikipedia, wolna encyklopedia. 17 grudnia 2018, 19:54 UTC. Dostępne pod adresem: en.wikipedia.org.