AGAR CZAPEK: PRZESŁANKI, PRZYGOTOWANIE, ZASTOSOWANIA I OGRANICZENIA - BIOLOGIA - 2025

Czapek (CZA) jest selektywnym pożywce zaprojektowany do uprawy saprofitycznych bakterie i grzyby. Został stworzony przez botanika Friedricha Johanna Franza Czapa, polskiego pochodzenia i amerykańskiego chemika Arthura Waylanda Doxa; z tego powodu ten agar jest również znany jako pożywka Czapek-Dox.

Pierwotne podłoże było płynne, ale później dodano agar, aby uczynić go stałym podłożem. Pożywka Czapek składa się z azotanu sodu, fosforanu bipotasu, siarczanu magnezu, chlorku potasu, siarczanu żelazawego, sacharozy, agaru i wody destylowanej.

Agar Czapek A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Źródło: A. Medmyco / B. Zdjęcie: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH agaru Czapek wynosi 7,3, ale istnieje wariant, w którym dodaje się 10% kwas mlekowy, którego pH utrzymuje się na poziomie 3,5. To środowisko kwaśne służy do hodowli mikroorganizmów kwasofilnych.

Z drugiej strony niektóre domy handlowe modyfikowały skład agaru Czapek, zmieniając siarczan magnezu i fosforan bipotasu na glicerofosforan; ta modyfikacja zapobiega tworzeniu się osadu fosforanu magnezu obserwowanego w przypadku konwencjonalnego preparatu. Istnieje również inny wariant, do którego dodaje się ekstrakt drożdżowy.

Wreszcie agar Czapek jest rekomendowany przez Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego APHA do badań Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp i Penicillium sp. Gatunki te charakteryzują się tym, że są mikroorganizmami środowiskowymi i patogenami oportunistycznymi.

Podstawa

To podłoże zawiera sacharozę; Ten węglowodan służy jako źródło węgla, podczas gdy azotan sodu jest źródłem azotu, ale w przeciwieństwie do innych mediów dostarczany azot jest nieorganiczny.

Z tego powodu pożywka Czapek jest uważana za selektywną, ponieważ mogą rosnąć tylko mikroorganizmy zdolne do wykorzystywania związków nieorganicznych jako jedynego źródła azotu.

Jako substancję regulującą osmolarność pożywki stosuje się fosforan bipotasu. Z kolei siarczan magnezu, chlorek potasu i siarczan żelazawy dostarczają niezbędnych minerałów do wzrostu mikroorganizmów saprofitycznych (wolno żyjących). Ta formuła tworzy osad fosforanu magnezu.

Wreszcie, agar-agar jest związkiem, który zapewnia stałą konsystencję pożywce, a woda jest rozpuszczalnikiem dla wszystkich składników.

Dzięki zmodyfikowanej formule agaru Czapek nie dochodzi do wytrącania się osadu, co poprawia wzrost niektórych grzybów.

Ekstremalna kwasowość Acid Czapek Agar sprawia, że ​​jest to podłoże bardziej selektywne, pozwalające na wzrost tylko mikroorganizmów kwasofilnych, zdolnych do wykorzystania nieorganicznego azotu. Tymczasem agar drożdżowo-Czapek poprawia działanie niektórych grzybów.

Przygotowanie

Średni Czapek-Dox

Odważyć 49 g odwodnionej pożywki hodowlanej i rozpuścić w wodzie destylowanej. Ogrzewać do wrzenia. Często wstrząsaj mieszaniną, aż do całkowitego rozpuszczenia.

-Czapek Agar Wedges

Rozprowadź rozpuszczoną mieszaninę w probówkach i autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut. Podczas wyjmowania z autoklawu homogenizować przed położeniem probówek i pozostawić do zestalenia.

-Płytki agarowe Czapek

Autoklawuj rozpuszczoną mieszaninę w 121 ° C przez 15 minut i pozostaw do ostygnięcia do 50 ° C, homogenizuj i wlej 20 ml do sterylnych szalek Petriego. Pozostaw do zestalenia, odwróć i przechowuj w lodówce do użycia.

PH powinno pozostać na poziomie 7,3 ± 0,2. Odwodnione podłoże ma kolor biały, a przygotowane podłoże jest jasno bursztynowe, lekko mętne z powodu obecności kłaczkującego osadu.

Pożywka Czapek o kwaśnym pH

Przygotować jak już opisano, dodając 10 ml sterylnego 10% kwasu mlekowego na każdy litr przygotowanej pożywki. Zmodyfikowana pożywka Czapek powinna mieć pH 3,5 ± 0,2.

Zmodyfikowane medium Czapek

Odważyć 45,4 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody. Pozostała część przygotowania jest taka sama, jak opisano powyżej. Odwodnione podłoże ma kolor biały, a przygotowane podłoże białawe. Końcowe pH pożywki wynosi 6,8 ± 0,2.

Pożywka drożdżowa Czapek

Zwany także agarem Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Zawiera elementy klasycznego agaru Czapek plus ekstrakt drożdżowy.

Posługiwać się

Pożywka Czapek służy do poszukiwania mikroorganizmów saprofitycznych m.in. w próbkach gleby, warzyw, zbóż, powietrza, owadów.

Agar Czapek o kwaśnym pH służy do wzrostu mikroorganizmów kwasofilnych, natomiast zmodyfikowany agar Czapek jest szczególnie przydatny do tworzenia chlamydospor u gatunków z kompleksu Candida albicans.

Wreszcie agar drożdżowy Czapek jest bardzo przydatny do izolacji Aspergillus i Penicillium.

Posiany

-Agar Czapek

Aby wyszukać promieniowce w glebie, należy postępować w następujący sposób: próbkę traktuje się wodą fenolizowaną przez 30 min, a następnie 1 ml zawiesiny wysiewa się na agarze Czapek. Inkubować w 28 ° C przez 5 do 7 dni.

Próbki warzyw, zbóż i owadów umieszcza się bezpośrednio na agarze. Można również wykonać rozcieńczenia i wysiać 0,1 ml na powierzchni agaru.

-Modyfikowany agar Czapek

Do wysiewu stosuje się prostą pętlę lub igłę, impregnuje się ją wacikiem, a agar zaszczepia, wykonując nakłucie, aż dotknie podstawy płytki. Inkubuj przez 24 godziny w 28 ° C i zbadaj pod mikroskopem powyżej i poniżej płytki, aby sprawdzić, czy utworzyły się chlamydospory.

Temperatura i czas inkubacji

Temperatura i czas inkubacji różnią się w zależności od rodzaju izolowanego mikroorganizmu. Płytki są na ogół inkubowane przez jeden do dwóch tygodni w zakresie temperatur od 20 do 25 ° C.

Jednak dla niektórych szczepów istnieją szczególne warunki. Na przykład większość gatunków z rodzaju Aspergillus rośnie optymalnie w temperaturze 30 ° C; jednakże A. fumigatus rośnie w temperaturze 50 ° C.

Jeśli chodzi o czas inkubacji, jeden lub dwa tygodnie jest normalny, jednak Candida albicans może rozwinąć się w ciągu 24 do 48 godzin w temperaturze 25 ° C.

Charakterystyka niektórych kolonii na tym podłożu

-Penicillium atrovenetum

Rozwija się po 12 dniach inkubacji w 27 ° C. Ich kolonie są małe (25 mm).

Kolonie mają aksamitny wygląd, z wyraźną białą obwódką i niebiesko-zielonym odcieniem w środku, który z wiekiem zmienia kolor na szary. Odwrotna strona kolonii jest pomarańczowa, dzięki czemu środek ma ten sam kolor ze względu na produkcję pigmentu.

-Aspergillus niger

Rozwija się z białą do żółtej grzybnią i czarnymi zarodnikami.

-Candida albicans

Powstają kremowe, jasnobeżowe kolonie. W zmodyfikowanym agarze Czapek tworzy chlamydospory.

-Aspergillus parasiticus

Ciemnozielona grzybnia rozwija się po 7 dniach w temperaturze 25 ° C.

QA

W celu oceny jakości pożywki można posadzić certyfikowane szczepy kontrolne, takie jak: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger rozwija białą lub żółtą grzybnię i czarne zarodniki w ciągu około 5 dni, podczas gdy Candida albicans osiągnie zadowalający wzrost po 24 godzinach inkubacji w 25 ° C; kolonie mają kolor kremowy.

Ograniczenia

Niektóre badania wykazały, że do wyzdrowienia promieniowców najlepiej plonuje agar ziemniaczano-dekstrozowy, na drugim miejscu znajduje się agar Czapek, ale w przypadku Aspergillus i Penicillium agar Czapek zapewnia najwyższy współczynnik odzysku.

Bibliografia

1. Dávila M, i in. Antagonistyczne promieniowce przeciwko fitopatogennym grzybom o znaczeniu rolniczym. Rev. Mex. Nauka. Agríc 2013, 4 (8): 1187–1196. Dostępne pod adresem: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Izolacja szczepów Aspergillus niger wytwarzających ochratoksynę A w przechowywanej zielonej kawie (Coffea arabica). Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Dostępne na.scielo.org.
3. Współtwórcy Wikipedii. Medium Czapek. Wikipedia, wolna encyklopedia. 13 stycznia 2019, 20:30 UTC. Dostępne pod adresem: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Zmodyfikowany agar Czapek-Dox. Dostępne pod adresem: condalab.com
5. Culture Media Microkit. Agar Czapek-Dox. Diosponible w: Medioscultivo.com