Podłoże agarowe Endo lub Endo jest podłożem stałym, zróżnicowanym iz pewnym stopniem selektywności. Oryginalna formuła została stworzona przez Endo w 1904 roku, aby odróżnić bakterie fermentujące laktozę od bakterii niefermentujących. Początkowo był przeznaczony do izolacji Salmonella typhi, ale później celem pożywki zwrócono się do poszukiwań bakterii z grupy coli.
Zasada działania Endo Agar została zachowana, ale jego skład na przestrzeni lat przeszedł niezliczone zmiany. Obecnie pożywka składa się z hydrolizatu tkanki zwierzęcej, laktozy, wodorofosforanu dipotasu, siarczynu sodu, fuksyny zasadowej i agaru.
A: Virgin Endo Agar B: Seeded Endo Agar, w środku agaru można zauważyć metaliczny połysk szczepu E. coli. Źródło: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Główne zastosowanie pożywki wiąże się z izolacją i różnicowaniem pałeczek Gram-ujemnych należących do rodziny Enterobacteriaceae i innych bliskich rodzin.
Przez długi czas był używany do wykrywania bakterii z grupy coli w próbkach wody, nabiału i żywności, ale dziś użycie tego podłoża zostało wyparte przez inne o podobnych funkcjach. Jednak niektóre laboratoria mikrobiologiczne używają tego agaru do izolacji Enterobacteriaceae z próbek pochodzenia klinicznego.
Podstawa
Agar Endo zawiera peptony, które są źródłem aminokwasów, azotu, węgla i energii, niezbędnych do wzrostu niewymagających mikroorganizmów.
Z drugiej strony lekko selektywny charakter agaru zapewnia dodatek siarczynu sodu i fuksyny zasadowej; oba składniki częściowo lub całkowicie hamują wzrost większości bakterii Gram-dodatnich.
Charakter różnicowy nadaje obecność węglowodanu ulegającego fermentacji, którym w tym przypadku jest laktoza i fuksyna zasadowa, która służy również jako wskaźnik pH.
Bakterie Gram-ujemne, które rosną na tym agarze i są zdolne do fermentacji laktozy, utworzą mocne różowe kolonie; będąc patognomonicznym dla Escherichia coli tworzą ciemnoczerwone kolonie z opalizującym zielonkawym metalicznym połyskiem. Wynika to z wysokiej produkcji kwasów z fermentacji węglowodanów.
Należy zauważyć, że podłoże wokół kolonii również przybiera intensywnie różowy kolor. Natomiast pałeczki Gram-ujemne niefermentujące laktozy tworzą bladoróżowe kolonie podobne do średnich lub bezbarwnych.
Wodorofosforan dipotasowy wyrównuje pH podłoża, a agar jest składnikiem zapewniającym stałą konsystencję.
Przygotowanie
Agar endo
Odważyć 41,5 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Podgrzewać mieszaninę, często mieszając, aż do całkowitego rozpuszczenia pożywki. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C, pod ciśnieniem 15 funtów, przez 15 minut.
Po wyjęciu z autoklawu pozostawić do ostygnięcia do temperatury około 45-50 ° C, a przed podaniem wstrząsnąć mieszanką w celu ujednorodnienia. Wlej 20 ml do sterylnych szalek Petriego.
Pozwól płytkom zestalić się, odwróć i przechowuj w plaquero lub zawiń w ciemny papier przed przechowywaniem w lodówce. Bardzo ważne jest, aby chronić przygotowane podłoże przed bezpośrednim światłem. Najlepszą praktyką jest przygotowanie dokładnej ilości, której będziesz potrzebować.
Jeśli płytki są przechowywane w lodówce, przed użyciem należy je rozgrzać.
PH pożywki powinno wynosić od 7,2 do 7,6, a kolor przygotowanej pożywki jest bladoróżowy.
Wariant z agarem M-Endo
Istnieje inna wersja agaru Endo (m-Endo), która jest zgodna ze wzorem McCarthy'ego, Delaneya i Grasso, która zawiera więcej związków i różni się formą preparatu.
Ten wariant zawiera: laktozę, tryptozę, enzymatyczny rozkład kazeiny, enzymatyczny rozkład tkanki zwierzęcej, chlorek sodu, dwuzasadowy fosforan potasu, siarczyn sodu, ekstrakt drożdżowy, jednozasadowy fosforan potasu, fuksynę zasadową, dezoksycholan sodu, laurylosiarczan sód i agar.
W tym przypadku 51 g odwodnionej pożywki odważa się i zawiesza w 1 litrze wody destylowanej zawierającej 20 ml etanolu.
Lekko podgrzewaj, mieszając, aż podłoże całkowicie się rozpuści. Nie należy go przegrzewać ani autoklawować. Gdy mieszanina będzie jednorodna, podawać na sterylnych szalkach Petriego i pozostawić do zestalenia.
Posługiwać się
W niektórych krajach jest nadal używany do liczenia bakterii coli ogółem i kałowych w próbkach pożywienia i wody, zwłaszcza obecności Escherichia coli jako głównego wskaźnika zanieczyszczenia kałem.
Agar M-Endo jest rekomendowany przez Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) do monitorowania i kontroli programów dezynfekcji i oczyszczania ścieków, a także do oceny jakości wody pitnej.
Najpowszechniej stosowaną metodą jest filtracja membranowa, po wzbogaceniu próbki bulionem laurylosiarczanowym przez 2 do 4 godzin.
Może być również stosowany jako substytut agaru EMB w analizie mikrobiologicznej pożywienia i wody metodą najbardziej prawdopodobnej liczby (MPN), szczególnie w fazie pełnej potwierdzenia, aby potwierdzić obecność E. coli z mętnych bulionów EC.
QA
Znane lub certyfikowane szczepy kontrolne wysiewa się w celu oceny jakości przygotowanej partii agaru Endo.
Wśród szczepów, które można wykorzystać w tym celu, są: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirac3iscus AT15CC 117 .
Szczepy wysiewa się przez wyczerpanie i inkubuje w 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.
Oczekiwane rezultaty to:
- Dla Escherichia coli: kolonie mocne, czerwone z metalicznym połyskiem.
- W przypadku E. cloacae i K. pneumoniae kolonie powinny mieć różowy śluzowaty kolor.
- W przypadku S. typhimurium, S. flexneri i P. mirabilis kolonie są zwykle bladoróżowe lub bezbarwne.
- Ostatecznie oczekuje się, że E. faecalis będzie częściowo zahamowane, dlatego jego wzrost musi być słaby z bardzo małymi, silnie różowymi koloniami.
Ograniczenia
- Podłoże Endo ma niską moc selektywną, dlatego jest możliwe, że niektóre mikroorganizmy Gram-dodatnie, takie jak Staphylococcus, Enterococcus, a nawet drożdże.
-Inne pałeczki nienależące do rodziny Enterobacteriaceae mogą rozwijać się na tym podłożu, takie jak Pseudomonas sp i Aeromonas sp. Charakterystyczne dla tych szczepów są bezbarwne nieregularne kolonie.
-To przygotowane podłoże jest bardzo wrażliwe na światło, dlatego długotrwałe narażenie na jego działanie pogarsza system wskaźnika, nieodwracalnie uszkadzając medium.
-Składniki medium są uważane za rakotwórcze, dlatego należy unikać bezpośredniego kontaktu.
-Odwodnione podłoże jest bardzo higroskopijne i należy je przechowywać w oryginalnym opakowaniu w temperaturze pokojowej, szczelnie zamknięte i w suchym miejscu.
Bibliografia
- BD Laboratories. Endo Agar. 2013 Dostępne na: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, wolna encyklopedia. 7 września 2017 r., 08:27 UTC. 28 lutego 2019, 22:55. Dostępne pod adresem: en.wikipedia.
- Laboratorium MercK. Agar endo. Dostępne pod adresem: merckmillipore.com
- Laboratoria kart technicznych. M –Endo Agar LES. 2015. Dostępne pod adresem: liofilchem.net