AGAR Z MĄKI KUKURYDZIANEJ: TŁO, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIE - BIOLOGIA - 2026

Agar mąka kukurydziana jest pożywce stałej, moc odżywcze użyteczne dla subkultury niektórych grzybów oraz do wykazania chlamidosporów szczepów Candida albicans złożone. W języku angielskim jest znany jako Corn Meal Agar.

Konwencjonalne podłoże z mąki kukurydzianej ma bardzo prosty skład, zawiera mąkę kukurydzianą, agar-agar i wodę. Ze względu na niski poziom odżywienia jest idealny do stosowania w utrzymaniu szczepów grzybów przez umiarkowane okresy, zwłaszcza czarnych.

A. Graficzne przedstawienie kompleksu Candida albicans na agarze z mąki kukurydzianej. B. Chlamydospory kompleksu Candida albicans widziane pod mikroskopem, utworzone na agarze z mąką kukurydzianą. Źródło: A. GrahamColm / B. Autor: CDC / Dr. William Kaplan, dzięki uprzejmości: Public Health Image Library.

Zarodnikowanie kompleksu Candida albicans jest korzystne w tej pożywce, jeśli podczas przygotowywania agaru zostanie dodany 1% Tween 80. Powstawanie chlamydospor jest charakterystyczne dla tego gatunku i praktycznie jedynego, które atakuje ludzi.

Istnieją inne gatunki, które tworzą chlamydospory, ale jest mało prawdopodobne, aby atakowały ludzi, takie jak Candida australis obecna w odchodach pingwinów lub C. clausenii, który jest rzadko spotykanym saprofitem. Podobnie, wyjątkowo mogły je tworzyć gatunki C. stellatoidea i C. tropicalis.

Z drugiej strony dodatek glukozy do pożywki z mąki kukurydzianej sprzyja tworzeniu się pigmentów w szczepach Trichophytom rubrum.

Należy podkreślić, że istnieją grzyby, które nie tworzą strzępek ani strzępek rzekomych na agarze z mąką kukurydzianą, takie jak Cryptococcus neoformans, różniące się od innych rodzajów.

Agar z mąką kukurydzianą można przygotować w domu w laboratorium lub można również użyć pożywek komercyjnych.

Podstawa

Substratem jest mączka kukurydziana, agar jest środkiem zestalającym, a woda jest rozpuszczalnikiem.

Agar z mąką kukurydzianą można uzupełnić tween 80 (monooleinian sorbitanu lub polisorbat poliester 80). Związek ten zmniejsza napięcie powierzchniowe medium dzięki swojej zdolności emulgującej.

Tworzy również wrogie środowisko, które hamuje nadmierne namnażanie się komórek i stymuluje wzrost strzępek, sprzyjając również produkcji chlamydospor; ten ostatni rozważał struktury oporu. Taka struktura pomaga w identyfikacji gatunku Candida albicans.

Ze swojej strony glukoza w tym podłożu zwiększa zdolność niektórych grzybów do tworzenia pigmentów.

Należy zauważyć, że pożywka z mąki kukurydzianej z glukozą nie jest przydatna do wykazania obecności chlamydospor w kompleksie Candida albicans.

Przygotowanie

Przygotowanie agaru z mąki kukurydzianej domowej roboty

Odważyć 47 g żółtej mąki kukurydzianej i rozpuścić w 500 ml wody destylowanej. Podgrzać do 60 ºC, mieszając preparat przez około 1 godzinę. Następnie przefiltrować przez kawałek gazy i waty, opcjonalnie można je ponownie przefiltrować przepuszczając preparat przez bibułę filtracyjną Whatman nr 2.

Uzupełnić objętość do 1000 ml wodą destylowaną. Dodaj 17 g agaru, podgrzewaj do rozpuszczenia. Autoklawuj przez 15 minut w 121 ºC.

Podawać na sterylnych szalkach Petriego. Przechowywać w lodówce.

Kolor przygotowanego podłoża jest białawy z grudkowatym wyglądem.

Chcąc przygotować do opisanego powyżej preparatu mąkę kukurydzianą z glukozą, należy dodać 10 g glukozy.

Handlowy agar z mąki kukurydzianej

Odważyć 17 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Mieszaninę można podgrzać, delikatnie wstrząsając, aby całkowicie się rozpuściła. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C, przy 15 funtów, przez 15 minut.

Wlać do sterylnych szalek Petriego. Niech zestalą się. Odwrócić i przechowywać w lodówce do momentu użycia. Odpuszczać przed użyciem.

PH powinno wynosić 6,0 ± 0,2 w temperaturze 25 ° C.

Agar z mąki kukurydzianej z Tween 80

Aby zachować zgodność z ISO 18416, agar z mąką kukurydzianą należy przygotować w następujący sposób:

Odważ 65 gramów na litr i dodaj 10 ml Tween 80. Podgrzewaj i gotuj przez kilka minut, aż się rozpuści, uważając, aby zbytnio się nie przegrzać. Sterylizuj w 121 ° C przez 15 minut.

Agar z mąki kukurydzianej z glukozą

Aby poprawić moc chromogenną kolonii Trichophyton rubrum i odróżnić je od T. mentagrophytes, do oryginalnej receptury można dodać 0,2% glukozy. Nie musisz mieć Tween 80, ponieważ glukoza hamuje tworzenie się chlamydospor.

Posługiwać się

Przede wszystkim zastosowanie agaru z mąki kukurydzianej jest przeznaczone do badania szczepów Candida, pomagając w ich identyfikacji poprzez charakterystyczną obserwację chlamydospor u gatunków albicans. Oznacza to, że użycie tego agaru służy jako pomocnicza metoda identyfikacji tych drożdży.

Na agarze mogą rozwijać się zarówno gatunki saprofityczne, jak i patogenne, ale każdy z nich tworzy charakterystyczne struktury grzybni. Na przykład gatunki z rodzaju Torulopsis nie wytwarzają grzybni i rozmnażają się wyłącznie przez blastokonidia.

Podobnie gatunki Trichosporon i Geotrichum wytwarzają artrokonidia na agarze z mąką kukurydzianą i czasami trudno jest odróżnić jeden od drugiego.

Arthroconidia z rodzaju Geotrichum wytwarzają przedłużenie strzępek przypominające kij hokejowy.

W identyfikacji Trichophytom rubrum przydatna jest również produkcja barwników na agarze z mąki kukurydzianej z dodatkiem glukozy.

Posiany

Podejrzane kolonie Candida uzyskane w pożywce pierwotnej - agarze Sabouraud - m.in. z próbek klinicznych, kosmetyków, gleb, hoduje się na agarze z mąki kukurydzianej. Pożywkę wysiewa się i inkubuje w 22 ° C przez 24 do 48 godzin. W razie potrzeby czas inkubacji można wydłużyć.

Pokaz chlamydospor

W tym celu agar z mąki kukurydzianej z Tween 80 należy zaszczepić techniką Dalmau. Metoda ta polega na pobraniu części podejrzanej rodziny platynową rączką i wykonaniu trzech równoległych cięć pośrodku, utrzymując rączkę pod kątem 45º. Cięcia powinny być oddalone od siebie o 1 cm.

Następnie na wysiane pasma umieszcza się uprzednio podpalony przedmiot zakrywający, tak aby połowa była zakryta, a druga odsłonięta.

Inkubować wysiane płytki w 30 ° C przez 48-72 h, a następnie zbadać pod mikroskopem przez szkiełko nakrywkowe.

Utrzymanie szczepów grzybów

W celu utrzymania szczepów wysiane i wyhodowane płytki są przechowywane w lodówce (4–8 ° C). W ten sposób mogą trwać kilka tygodni i służyć do celów dydaktycznych lub badawczych.

QA

W celu kontroli sterylności płytkę inkubuje się bez inokulacji w temperaturze pokojowej, oczekuje się, że nie będzie wzrostu ani zmiany koloru.

W celu kontroli jakości można wysiewać znane szczepy, takie jak: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Oczekiwane rezultaty to częściowe zahamowanie rozwoju S. aureus i E. coli. W przypadku pozostałych szczepów oczekuje się zadowalającego wzrostu.

Aspergillus niger rośnie z czarnymi i zarodnikującymi koloniami w przybliżonym czasie 5 dni inkubacji.

Kolonie drożdży Candida albicans z produkcją chlamydospor.

Saccharomyces cerevisiae wytwarzają duże komórki drożdży.

Ograniczenia

Na dnie płytki tworzy się żółty osad, którego nie należy mylić z koloniami.

Bibliografia

1. Neogen Laboratories. Agar z mąką kukurydzianą. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com.
2. Culture Media Microkit. Agar z mąką kukurydzianą. Dostępne na: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Przewodnik identyfikacji drożdży. Dostępne pod adresem: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Zdrowie publiczne, 2002; 19 (4): 206-208. Dostępne na: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. General Mycology. 1994. Wydanie drugie Central University of Venezuela, Library Editions. Wenezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Badanie porównawcze niektórych makro i mikroskopowych metod izolacji i rozpoznawania rodzaju Candida. Kolumbijski Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. Dostępne pod adresem: Ciencias.unal.edu.co