AGAR MACCONKEY: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Agar macconkeya jest solidnym medium, które pozwala wyłączne izolację bakterii Gram-ujemnych. Z tego powodu jest to podłoże selektywne, a także pozwala na rozróżnienie pałeczek fermentujących i niefermentujących, co czyni je podłożem różnicującym. Jest to jedna z najczęściej stosowanych pożywek hodowlanych w laboratorium mikrobiologicznym.

Pożywka ta jest używana głównie do izolacji pałeczek Gram-ujemnych z rodziny Enterobacteriaceae, w tym gatunków oportunistycznych i enteropatogennych.

Agar MacConkey wysiany dwoma rodzajami bakterii. Kolonie fermentujące laktozę po lewej stronie, kolonie niefermentujące laktozy po prawej stronie.

Może być również stosowany do izolacji innych pałeczek jelitowych, które żyją w przewodzie pokarmowym, ale nie należą do Enterobacteriaceae, takich jak między innymi Aeromonas sp, Plesiomonas sp.

Wreszcie, może izolować inne pałeczki Gram-ujemne nie powodujące fermentacji glukozy, które występują w środowisku, wodzie lub glebie, ale czasami mogą to być patogeny oportunistyczne, takie jak między innymi Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia.

Podstawa

Agar MacConkey

Podstawy tego medium można wyjaśnić poprzez opis jego składników, ponieważ każdy z nich ma cel, który określa jego właściwość.

Sole żółciowe i fiolet krystaliczny

W tym sensie agar MacConkey ma złożony skład. Przede wszystkim zawiera sole żółciowe i fiolet krystaliczny.

Pierwiastki te są odpowiedzialne za hamowanie wzrostu bakterii Gram-dodatnich i niektórych wymagających pałeczek Gram-ujemnych. To z kolei sprzyja rozwojowi pałeczek Gram-ujemnych, na które te substancje nie mają wpływu. Dlatego jest to podłoże selektywne.

Mówi się, że jest nieco selektywny w porównaniu z innymi pożywkami, które również hamują wzrost bakterii Gram-dodatnich, a także większości bakterii Gram-ujemnych.

Peptony, polipektony i laktoza

Zawiera substancje dostarczające niezbędnych składników odżywczych mikroorganizmom rozwijającym się w tym środowisku, takie jak peptony, polipektony i laktoza.

Laktoza jest kluczowym elementem, aby pożywka była pożywką różnicującą, ponieważ mikroorganizmy, które mają zdolność fermentacji laktozy, utworzą silne różowe kolonie.

Niektóre bakterie mogą powoli lub słabo fermentować laktozę, tworząc jasnoróżowe kolonie i pozostawiając laktozododatnie.

Te, które nie fermentują laktozy, wykorzystują peptony jako źródło energii, produkując amoniak, alkalizując pożywkę. Z tego powodu kolonie, które powstają, są bezbarwne lub przezroczyste.

Wskaźnik PH

Zmiana koloru jest osiągana przez inny istotny związek, który ma agar MacConkey. Ten związek jest wskaźnikiem pH, który w tym przypadku ma kolor neutralny czerwony.

W wyniku fermentacji laktozy powstają mieszane kwasy. Zakwaszają środowisko do pH poniżej 6,8.

Powoduje to, że wskaźnik pH zmienia się w ciemnoróżowy odcień. Intensywność koloru może się różnić w zależności od końcowego pH.

Woda destylowana, chlorek sodu i agar

Z drugiej strony zawiera wodę destylowaną i chlorek sodu, które zapewniają medium nawilżenie i równowagę osmotyczną. Wreszcie podłoże zawiera agar, który jest podstawą zapewniającą konsystencję podłoża stałego.

Przygotowane podłoże agarowe MacConkey powinno mieć końcowe pH dostosowane do 7,1 ± 0,2.

Przygotowanie

Na jeden litr agaru MacConkey należy odważyć 50 g odwodnionej pożywki, a następnie umieścić w kolbie i rozpuścić w jednym litrze wody destylowanej. Po 10 minutach odstania podgrzewa się, ciągle mieszając do wrzenia przez 1 minutę.

Kolbę następnie umieszcza się w autoklawie i sterylizuje w 121 ° C przez 20 minut. Pod koniec tego czasu jest wyjmowany z autoklawu i pozostawiony do ostygnięcia do osiągnięcia temperatury 45 ° C, aby później podawać na sterylnych szalkach Petriego pod osłoną z przepływem laminarnym lub przed palnikiem Bunsena.

Pozostawić do zestalenia i przechowywać w odwróconym pojemniku na płytki i przechowywać w lodówce w temperaturze 2–8 ° C do momentu użycia.

Aby uzyskać agar MacConkey, który hamuje efekt pęcznienia wytwarzany przez rodzaj Proteus, stosuje się agar MacConkey o niskiej zawartości soli.

Wykorzystuje konwencjonalny agar MacConkey

MacConkey Agar znajduje się we wszystkich zestawach pożywek przeznaczonych do wysiewu próbek klinicznych otrzymanych w laboratorium. Jest również przydatny w mikrobiologii żywności i mikrobiologii środowiskowej.

Różnorodność pałeczek Gram-ujemnych, które rosną w tym podłożu, wykazuje cechy fenotypowe, które pomagają w postawieniu przypuszczalnej diagnozy danego gatunku. Na przykład rozmiar, kolor, konsystencja i zapach kolonii to tylko niektóre z cech, którymi można się kierować.

Na tym podłożu gatunki Escherichia coli, Klebsiella sp i Enterobacter sp wytwarzają silne różowe kolonie otoczone strefą wytrąconej żółci.

Natomiast bakterie takie jak Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp i Hafnia sp mogą wydawać się bezbarwne po 24 godzinach lub bladoróżowe po 24-48 godzinach.

Podobnie rodzaje Proteus, Edwadsiella, Salmonella i Shigella tworzą bezbarwne lub przezroczyste kolonie.

Inne warianty agaru MacConkey

Istnieją inne warianty MacConkey Agar, które mają określone przeznaczenie. Są one wymienione poniżej:

Agar MacConkey z sorbitolem

To podłoże zostało zaprojektowane w celu odróżnienia enteropatogennego szczepu (enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7) od pozostałych szczepów Escherichia coli.

Pożywka ta zamienia laktozę węglowodanową na sorbitol. Szczepy jelitowo krwotoczne E. coli O157: H7 różnią się od pozostałych, ponieważ nie fermentują sorbitolu, dzięki czemu uzyskuje się przezroczyste kolonie, podczas gdy pozostałe szczepy E. coli fermentują sorbitol, a kolonie są mocno różowe.

Agar MacConkey bez fioletu krystalicznego ani soli

Agar ten znacznie różni się od klasycznego agaru MacConkey, ponieważ nie ma fioletowego kryształu i mogą rosnąć bakterie Gram-dodatnie.

Z drugiej strony brak soli hamuje pojawienie się roju na agarze wytwarzanym przez niektóre pałeczki jelitowe, np. Z rodzaju Proteus, a tym samym ułatwia izolację wszystkich obecnych bakterii, w tym bakterii Gram-dodatnich.

Agar MacConkey z cefoperazonem

Ten wariant MacConkey Agar został zaprojektowany do początkowej izolacji Laribacter hongkongensis, a później okazał się przydatny do izolacji Arcobacter butzleri. Oba są lekko zakrzywionymi pałeczkami Gram-ujemnymi opornymi na cefoperazon.

Niedawno powiązano te bakterie z wywoływaniem zapalenia żołądka i jelit oraz nabytą biegunką u osób z Azji i Europy, wyłaniając się jako dwa potężne pojawiające się patogeny.

Antybiotyk pozwala zahamować florę towarzyszącą przewodu pokarmowego, co sprzyja rozwojowi tych bakterii, zapobiegając ich niezauważaniu, gdyż potrzebują 72 godzin wzrostu.

Agar MacConkey przygotowany z wodą morską o stężeniu 10% v / v

Wariant ten jest przydatny do oceny bakteryjnych wskaźników sanitarnych skażenia odchodami, w tym bakterii z grupy coli i bakterii coli w kałowych wodach rekreacyjnych słonych (plażach i zatokach).

Cortez i wsp. W 2013 roku wykazali, że tak przygotowane podłoże znacząco zwiększa regenerację tych mikroorganizmów w środowisku zasolonym w porównaniu z zastosowaniem agaru MacConkey przygotowanego na wodzie destylowanej.

Wynika to z faktu, że zmodyfikowana pożywka stymuluje wzrost bakterii, które są fizjologicznie w stanie utajenia „żywotne, ale nieulegające hodowli”, dlatego nie można ich odzyskać w konwencjonalnych pożywkach.

Bibliografia

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT i wsp. Zastosowanie agaru z cefoperazonem MacConkey do selektywnej izolacji Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839–41.
2. Agar MacConkey. Wikipedia, wolna encyklopedia. 4 kwietnia 2018, 18:16 UTC. 29 grudnia 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna. Od redakcji Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. (Wyd. 5). Argentyna, od redakcji Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Wpływ pożywek hodowlanych przygotowanych z wodą morską na wskaźniki zdrowia wód morskich uzdrowisk w Chichiriviche, stan Falcón, Wenezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Serwis Publikacji UCA.