AGAR ODŻYWCZY: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Agarowej jest nieselektywnym pożywki hodowlanej bez hodowli różnica stałej. Na tym podłożu rosną wszystkie rodzaje bakterii, które nie są wymagające z żywieniowego punktu widzenia.

Jest to proste podłoże i pomimo swojej nazwy zawiera mniejszą wartość odżywczą w porównaniu z innymi podobnymi pożywkami, takimi jak Brain Heart Infusion Agar czy Trypticase Soy Agar.

Liczebność kolonii na agarze odżywczym

Jego przydatność w laboratorium jest bardzo zróżnicowana. Służy głównie do subhodowli gatunków, utrzymywania szczepów, liczenia kolonii, jako podstawa m.in. do przygotowania agaru z krwią.

Podobnie, ze względu na jasnobeżowy kolor, można wyjątkowo wyróżnić produkcję pigmentów generowanych przez niektóre szczepy bakterii, takich jak zielonkawy pigment Pseudomonas aeruginosa, ceglasty pigment wytwarzany przez Serratia marcescens w temperaturze pokojowej, złocistożółty pigment Staphylococcus aureus między innymi.

Ponadto jest to jeden z najtańszych podłoży uprawowych na rynku.

Podstawa

Jak już wspomniano powyżej, jest to bardzo proste podłoże, które polega na dostarczaniu składników odżywczych do wzrostu bakterii bez ograniczeń i bez złożonych reakcji interpretacyjnych.

Ponieważ podłoże jest przezroczyste, jest idealne do liczenia kolonii metodą wysiewu na głębokość.

Kompozycja

Zawiera głównie wyciąg z mięsa lub drożdży, peptony lub żelatynę, hydrolizat trzustkowy, agar-agar, chlorek sodu i wodę destylowaną.

Ekstrakt z mięsa lub drożdży oraz peptony stanowią podstawowe źródła węgla i minerałów (azotu, fosforu i siarki), które będą wykorzystywane przez bakterie jako źródło energii i czynników wzrostu.

Podobnie, agar-agar jest podstawą wszystkich stałych pożywek hodowlanych, zastępując żelatynę, która była pierwszym związkiem bazowym zastosowanym przez Roberta Kocha w celu nadania stałej konsystencji jego pożywce.

Agar to polisacharyd złożony z galaktozy, galaktomannanu, agarozy i agaropektyny. Ustawia się w 40 ° C i topi się blisko 100 ° C.

Chlorek sodu ze swojej strony zapewnia pożywce osmolarność niezbędną do rozwoju bakterii.

Wreszcie woda służy do hydratacji i rozpuszczenia liofilizowanych związków. Należy używać wody destylowanej o pH neutralnym. Nie należy używać wody wodociągowej, ponieważ zawiera wapń i magnez, które mogą reagować z fosforanami w pożywce i tworzyć nierozpuszczalne sole.

Przygotowanie

Na jeden litr odżywczego agaru należy zważyć 31 g odwodnionej pożywki. Umieścić w kolbie i rozpuścić w litrze wody destylowanej. Po 5 minutach odstawienia podgrzać nad źródłem ciepła i ciągle mieszać do wrzenia przez 1 lub 2 minuty.

Przygotowanie pożywki.

Kolbę następnie umieszcza się w autoklawie i sterylizuje w 121 ° C przez 20 minut.

Sterylizacja w autoklawie

Pod koniec tego czasu jest wyjmowany z autoklawu i podawany na sterylnych szalkach Petriego przy użyciu okapu z przepływem laminarnym lub palnika Bunsena.

Jeśli szalki Petriego są jednorazowe (plastikowe), pożywkę należy rozprowadzić, gdy agar ma temperaturę około 50 ° C, aby zapobiec ich deformacji przez nadmierne ciepło.

Pozostawić do zestalenia i przechowywać na odwróconym uchwycie do płytek i przechowywać w lodówce w temperaturze 2–8 ° C do momentu użycia.

Talerze muszą być hartowane przed zaszczepieniem. Nie należy używać płytek z agarem odżywczym, jeśli są zanieczyszczone lub odwodnione.

PH przygotowanej pożywki należy ustawić na 7,3 ± 0,2.

Aplikacje

Jest to najprostsze podłoże hodowlane stosowane w laboratorium mikrobiologicznym. Jego formuła jest doskonała do wzrostu niewymagających bakterii.

Jego główne zastosowania wyjaśniono poniżej:

Jako podstawa do przygotowania agaru z krwią

Podłoże to jest czasami używane jako baza do przygotowania agaru z krwią, jednak nie jest to najczęściej stosowana baza.

Stymuluj zarodnikowanie bakterii tworzących przetrwalniki

Ta pożywka hodowlana jest szczególnie przydatna do stymulowania zarodnikowania bakterii tworzących przetrwalniki, takich jak Bacillus sp.

W tym celu szczep z rodzaju Bacillus wysiewa się i inkubuje przez 24 godziny w temperaturze 37 ° C w warunkach tlenowych. Po wyrośnięciu kolonii płytkę poddaje się stresowi termicznemu, to znaczy, temperaturę pieca podnosi się do 44 ° C i pozostawia na kolejne 24 godziny lub umieszcza w lodówce na 24 godziny.

Na koniec wykonuje się rozmaz kultury i barwi go barwnikiem Grama lub barwnikiem zarodników Shaeffer-Fulton. Będą w nich obserwowane Bacilli z przetrwalnikami (zarodniki wewnątrz Bacillus) i egzospory (zarodniki poza Bacillus).

Utrzymanie szczepu

Niektóre laboratoria badawcze lub akademickie wymagają utrzymywania żywotnych bakterii o znaczeniu klinicznym tak długo, jak to możliwe, w celu wykorzystania banku bakterii (bakterioteca) do prac badawczych lub do przygotowania praktyk dydaktycznych, gdzie Studenci nauczą się manipulować i identyfikować te mikroorganizmy.

W tym celu można zastosować agar odżywczy, jak również agar infuzyjny mózg-serce. Agar jest przygotowywany, wlewany do probówek z bakelitową pokrywką i przechylany na podłożu w taki sposób, aby agar zestalił się tworząc blok na dnie i fazę na powierzchni (dziób fletowy).

Każda probówka jest oznaczona nazwą bakterii, które mają być wysiane, oraz datą. Każda z bakterii zostanie wysiana na skos i inkubowana przez 24 h. Po wyrośnięciu kolonii probówki przechowuje się w temperaturze pokojowej.

Bakterioteca należy odnawiać od 1 do 3 miesięcy, aby uniknąć zanieczyszczenia i odwodnienia pożywki, a także śmierci bakterii.

W ten sposób można utrzymać tylko nie-wybredne bakterie.

Liczba kolonii

Chociaż istnieją wyspecjalizowane środki do liczenia kolonii, takie jak standardowy agar do liczenia, do tego celu można użyć agaru odżywczego, poprzez wysiew powierzchniowy szpatułką drigalskiego lub na głębokość. Z tego powodu jest bardzo przydatny w analizie mikrobiologicznej żywności i wody.

Przeprowadzanie testów diagnostycznych

Ponieważ jest to podłoże, które nie zawiera krwi ani żadnych innych dodatków, jest idealne do pobrania kolonii wyhodowanych na tym podłożu w celu wykonania testu na katalazę.

Podobnie, ze względu na jasną barwę, wskazane jest przeprowadzanie testów oksydazy bezpośrednio na wysianym obszarze agaru, bez ingerencji.

Odzyskiwanie mezofilnych aerobów z rekreacyjnych wód słonych (Plaże)

Agar odżywczy przygotowany z 10% wody morskiej jest przydatny do oceny aerobów mezofilnych w wodach plaży.

W ten sposób można ocenić rzeczywisty poziom zanieczyszczenia wody tymi mikroorganizmami, ponieważ w tego typu próbkach wyniki nakładają się, gdy stosuje się pożywki hodowlane przygotowane w konwencjonalny sposób.

Wykazali to Cortez i wsp. w 2013 roku w pracy naukowej.

Można to wytłumaczyć nagłą zmianą, jaką przechodzą bakterie podczas przechodzenia ze środowiska przesolonego do środowiska o niskiej zawartości soli, dlatego mikroorganizmy wchodzą w stan letargu, w którym są zdolne do życia, ale nie nadają się do hodowli.

Bibliografia

1. „Agar odżywczy”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 13 września 2016 r., 20:33 UTC. 29 grudnia 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna. Od redakcji Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. (Wyd. 5). Argentyna, od redakcji Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Wpływ pożywek hodowlanych przygotowanych z wodą morską na wskaźniki zdrowia wód morskich uzdrowisk w Chichiriviche, stan Falcón, Wenezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M i Cardoso M. Jakość mikrobiologiczna wody do dawek inseminacyjnych dla świń. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42–49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Serwis Publikacji UCA.