Agar sól mannitol lub mannitol soli jest w postaci stałej i selektywną pożywkę kultury różnicowego. Został stworzony przez Chapmana do izolacji patogennych ziarniaków Gram-dodatnich, zwłaszcza Staphylococcus aureus.
Jednak przydatne jest również wyizolowanie Staphylococus epidermidis, który czasami może występować jako patogen oportunistyczny, oraz Staphylococcus saprophyticus, uznanego patogenu układu moczowego, wśród innych gatunków.
A. Fiola z przygotowanym podłożem agarowym ze słonym mannitolem. B. Płytki agarowe z solonym mannitolem zaszczepione fermentującymi i niefermentującymi szczepami bakterii mannitolu. Źródło: A i B: Zdjęcia autorstwa mgr inż. Marielsa Gil.
Niektóre Enterococcus mogą rosnąć na tym podłożu, a także niektóre Gram-dodatnie pałeczki tworzące przetrwalniki.
To podłoże jest bardzo przydatne w analizie próbek klinicznych, ale znajduje również zastosowanie w badaniach mikrobiologicznych żywności oraz w kontroli jakości produktów przemysłowych, takich jak m.in. kosmetyki, leki.
Solony agar z mannitolem składa się z ekstraktów i peptonów z wołowiny, tripteiny, mannitolu, chlorku sodu, czerwieni fenolowej i agaru.
Podstawa
Agar z mannitolem jest selektywny dzięki wysokiemu stężeniu soli. Zasolenie działa hamująco i zapobiega rozwojowi bakterii Gram-ujemnych.
Różni się również ze względu na obecność mannitolu węglowodanowego i wskaźnika pH czerwieni fenolowej. Z tego powodu bakterie zdolne do fermentacji mannitolu wytwarzają kwasy, zakwaszając podłoże, powodując żółknięcie kolonii i podłoża.
Z drugiej strony kolonie, które nie fermentują mannitolu, rosną w pożywce, pobierając składniki odżywcze dostarczane przez ekstrakty mięsne oraz peptony i tripteinę. Stamtąd bakterie pobierają węgiel, azot, witaminy i minerały niezbędne do ich wzrostu.
W tym przypadku kolonie mogą być słabe lub mocno różowe, a podłoże zachowuje ten sam kolor lub zmienia się w fuksję.
Agar to substancja zapewniająca konsystencję pożywce.
Przygotowanie
Aby przygotować litr agaru ze słonym mannitolem, odważa się 111 g odwodnionej pożywki z preferowanej firmy handlowej i rozpuszcza w 1000 ml wody destylowanej za pomocą kolby.
Ciepło jest doprowadzane z częstym mieszaniem medium, aby poprawić proces rozpuszczania. Gotować przez minutę.
Kolbę umieszcza się w autoklawie w 121 ° C na 15 minut.
Pod koniec czasu wyjąć fiolkę z autoklawu, odstawić na odpoczynek i podawać od 15 do 20 ml na sterylnych szalkach Petriego, gdy temperatura wynosi około 50 do 55 ° C.
Dozwolone jest zestalenie, porządkowanie w odwróconej kolejności w plaqueros i przechowywanie w lodówce do czasu użycia. Przed zaszczepieniem próbki poczekaj, aż płytka osiągnie temperaturę pokojową.
Płytki wysiewa się przez posiew pasmowy lub wysiew powierzchniowy szpatułką drigalskiego. Końcowe pH przygotowanej pożywki musi wynosić 7,4 ± 0,2
Odwodnione podłoże ma kolor jasnobeżowy, a przygotowane podłoże pomarańczowo-czerwone.
Aplikacje
Ze względu na wysoką selektywność podłoże to jest idealne do wysiewu próbek z mieszaną florą, w których chcemy szukać obecności Staphylococus aureus, jako głównego patogenu tego rodzaju.
W tym sensie jednym z jego najczęstszych zastosowań jest analiza mikrobiologiczna wysięku z gardła i wydzieliny z nosa, zwłaszcza w celu wykrycia bezobjawowych nosicieli S. aureus.
Niektóre kraje wprowadziły tę analizę jako obowiązkowy wymóg dla osób, które chcą pracować jako sprzedawcy żywności.
Kontrola ta zapobiega zatrudnianiu osób, które są nosicielami S. aureus, unikając w ten sposób masowego zatrucia pokarmowego w wyniku spożycia żywności skażonej enterotoksyną gronkowcową.
Może być również włączony do wysiewu infekcji ran, posiewów krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, między innymi.
Agar z solonym mannitolem jest przydatny do ponownego izolowania kolonii z hodowli moczu z agaru CLED lub agaru z krwią, w których Gram-dodatnie ziarenkowce ujawniły skupiska.
Sprawdza się również w analizie mikrobiologicznej żywności, wody pitnej, gleb i innych zastosowań.
QA
Po przygotowaniu partii płytek ze słonym agarem z mannitolem zaleca się przeprowadzenie kontroli jakości. Szczepy kontrolne wysiewa się, aby pokazać, czy występuje wzrost, czy nie.
Jako kontrolę pozytywną można zastosować znane szczepy Staphylococcus aureus. Powinien rosnąć zadowalająco, rozwijając żółte kolonie, a podłoże również przybiera ten sam kolor.
Podobnie, wygodnie jest włączyć znany szczep Staphylococcus epidermidis. Powinien rosnąć zadowalająco, rozwijając różowe kolonie, a podłoże zachowuje ten sam kolor lub ciemnieje do silniejszego różu.
Jako kontrolę negatywną stosuje się szczepy, które nie powinny rosnąć na tym podłożu. Na przykład można hodować znany szczep Escherichia coli lub Klebsiella pneumoniae. Oczekiwanym rezultatem jest całkowite zahamowanie, czyli brak wzrostu.
Dodatkowo niezaszczepiona płytka musi być inkubowana. W nim nie powinno być wzrostu ani zmiany koloru.
Ważne jest, aby płytka nie była używana, jeśli występują oznaki zepsucia, takie jak między innymi zabrudzenie, odwodnienie, przebarwienia.
Końcowe przemyślenia
Używając podłoża agarowego ze słonym mannitolem, należy wziąć pod uwagę kilka ważnych aspektów:
- Uzyskanie wzrostu żółtych kolonii nie oznacza, że jest to Staphylococcus aureus. Należy pamiętać, że niektóre szczepy Enterococcus są zdolne do wzrostu w tym podłożu i fermentacji mannitolu, a także niektóre pałeczki Gram-dodatnie tworzące przetrwalniki.
Dlatego ważne jest wykonanie Grama na kolonii i test na katalazę.
-Z drugiej strony należy wziąć pod uwagę, że inne gatunki Staphylococcus inne niż aureus są również zdolne do fermentacji mannitolu. Dlatego ważne jest, aby przejść kolonię do bulionu odżywczego, który stamtąd pobrać i wykonać test koagulazy.
Wśród gatunków Staphylococcus o znaczeniu klinicznym dla człowieka, które fermentują mannitol, są między innymi: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum.
Inni mogą dawać zmienną reakcję, to znaczy czasami pozytywną, a czasami negatywną. Niektóre z nich to między innymi S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S.mediusus.
-Nie zaleca się pobierania kolonii bezpośrednio z agaru mannitolowego w celu wykonania testu koagulazy, ponieważ wysokie stężenie soli w pożywce może wpływać na wynik.
-Na koniec zaleca się inkubację płytek wysianych solonym mannitolem do 48 godzin, ponieważ niektóre szczepy S. aureus mogą powoli fermentować mannitol, chociaż nie jest to zbyt częste.
Bibliografia
- Britannia Laboratories. Agar ze słonym mannitolem. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
- „Agar ze słonym mannitolem”. Wikipedia, wolna encyklopedia. 31 października 2018, 19:08 UTC. 17 stycznia 2019, 20:55, dostępne pod adresem: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologiczna. (Wyd. 5). Argentyna, od redakcji Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna. Od redakcji Panamericana SA
- BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013 Dostępne na: bd.com.