AGAR SOJOWY Z TRYPTYKAZĄ: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Soja agar tryptonu lub Trypticase Soy Agar jest stałe podłoże hodowlane i nieselektywne odżywcze. Jest oznaczony literami TSA jako akronim w języku angielskim Trypticase Soy Agar. Składa się z tripteiny, peptonu sojowego, chlorku sodu i agaru.

Ze względu na wysoką wartość odżywczą jest idealny do hodowli średnio wymagających i niewymagających mikroorganizmów. Pożywka bez dodatkowych suplementów nie jest zalecana do kultur pierwotnych, ale jest bardzo przydatna między innymi do wyhodowania czystych szczepów i utrzymania ich żywotności.

Agar sojowy z tryptykazą w postaci klinów w probówkach z bakelitowymi nakrętkami. Źródło: Zdjęcie autorstwa mgr inż. Marielsa Gil.

Agar ten służy również jako podstawa do przygotowania wzbogaconych podłoży, takich jak agar z krwią, zwłaszcza gdy wymagane jest obserwowanie wzorców hemolizy i montowanie taksonów optokiny i bacytracyny, wymaganych odpowiednio w diagnostyce Streptococcus pneumoniae i Streptococcus pyogenes.

Z drugiej strony, w połączeniu z antybiotykami, przydatne jest izolowanie klinicznie ważnych mikroorganizmów fakultatywnych i ściśle beztlenowych z próbek o mieszanej florze.

Wreszcie, skład agaru sojowego tryptykazowego i jego działanie spełnia wymagania określone przez różne farmakopee (europejską, japońską i północnoamerykańską).

Podstawa

Do prawidłowego rozwoju bakterii niezbędna jest obecność źródeł energii, takich jak aminokwasy, witaminy, zasady purynowe i pirymidowe.

W tym sensie tripteina i pepton sojowy dostarczają te składniki odżywcze mikroorganizmom, umożliwiając w ten sposób ich pełny rozwój. Jednak w przypadku wybrednych bakterii konieczne jest uzupełnienie tego agaru odwłóknioną lub podgrzaną krwią w celu zwiększenia jego wzbogacenia.

Z drugiej strony po dodaniu antybiotyków do pożywki staje się ona pożywką selektywną. 0,6% ekstrakt drożdżowy można również dodać, aby sprzyjać izolacji gatunków z rodzaju Listeria, podczas gdy dodatek tellurynu cystyny ​​i krwi baraniej jest idealny dla Corynebacterium diphteriae.

Wreszcie chlorek sodu zapewnia równowagę osmotyczną pożywce, a agar zapewnia stałą konsystencję.

Przygotowanie

Płytki z agarem sojowym z tryptykazą

W celu przygotowania agaru sojowego z tryptykazą należy odważyć 40 g odwodnionej komercyjnej pożywki na wadze cyfrowej. Rozpuszcza się go w jednym litrze wody destylowanej zawartej w kolbie.

Mieszaninę pozostawia się na 5 minut, a następnie przenosi do źródła ciepła, aby pomóc w rozpuszczeniu pożywki. Należy często mieszać i gotować przez 1 do 2 minut. Następnie pożywkę sterylizuje się w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Pozostawić do ostygnięcia do 50 ° C i rozprowadzić na sterylnych szalkach Petriego. Pozostawić do zestalenia, odwrócić, uporządkować w plaqueros i przechowywać w lodówce.

Końcowe pH pożywki powinno wynosić 7,3 ± 0,2.

Należy zauważyć, że odwodniona pożywka hodowlana jest koloru jasnobeżowego i powinna być przechowywana w temperaturze od 10 do 35 ° C w suchym miejscu.

Z kolei przygotowany agar ma kolor jasno bursztynowy. Przygotowane płytki należy przechowywać w lodówce (2-8 ° C) do momentu użycia.

Płytki przed użyciem muszą osiągnąć temperaturę pokojową.

Płytki z agarem sojowym z tryptykazą z dodatkiem krwi

Agar z krwią przygotowuje się przez dodanie 5% odwłóknionej krwi w czasie schładzania agaru sojowego z tryptykazą do temperatury 50 ° C. Mieszaninę homogenizuje się obracając delikatnymi ruchami.

Podawać na sterylnych szalkach Petriego. Środkowy kolor powinien być wiśniowy.

Płytki z agarem sojowym z tryptykazą i dodatkiem podgrzanej krwi

Aby przygotować agar z krwią na bazie TSA, należy postępować tak samo, jak procedury już opisane, ale po wyjściu z autoklawu pozostawia się go w spoczynku, aż temperatura pożywki osiągnie około 56 do 70 ° C W tym czasie krew jest umieszczana i mieszana, aż podłoże stanie się brązowe.

Podawać na sterylnych szalkach Petriego. Kolor medium to czekoladowy brąz.

Kliny agaru sojowego z tryptykazą

Procedura przygotowania agaru jest taka sama, jak opisana dla płytek, z tą różnicą, że zamiast podawać pożywkę na szalkach Petriego, przed sterylizacją rozprowadza się ją między 10 a 12 ml w probówkach z pokrywką bakelitową.

Następnie probówki autoklawuje się w 121 ° C przez 15 minut. Kiedy odchodzą, są skłonni przy pomocy podpory i pozwalają im zestalić się.

Przygotowane kliny są wysiewane według powierzchni i służą do utrzymania żywotności niektórych mało wymagających mikroorganizmów przez określony czas.

Aplikacje

Agar Trypticasein Soy Agar jest stosowany w następujących przypadkach:

-Jako podstawa do przygotowania klasycznego agaru z krwią, który jest rutynowo używany w większości laboratoriów.

-Izolacja wymagających bakterii.

-Obserwacja wzoru hemolizy.

-Wykonanie badań diagnostycznych.

- Jako baza do przygotowania specjalnego agaru z krwią dla Corynebacterium diphteriae, z tellurynem cystyny ​​i krwią jagnięcą.

-Jako baza do przygotowania agaru z krwią jagnięcą plus kanamycyna-wankomycyna do wzrostu beztlenowców, zwłaszcza Bacteroides sp.

- Do pielęgnacji mało wymagających szczepów (Bacterioteca).

- Liczba drobnoustrojów tlenowych w badaniu limitu drobnoustrojów w próbkach wody, środowiska, żywności i kosmetyków.

Posiany

Próbki można wysiewać bezpośrednio na powierzchnię podłoża Trypticasein Soy Agar z dodatkiem krwi lub innych dodatków. Zasiewa się z wyczerpania.

Natomiast płytki agarowe z tryptykaziną i soją bez dodatków są na ogół używane do hodowli szczepów drobnoustrojów (bakterii lub drożdży).

QA

Kontrola sterylności

Aby sprawdzić jałowość różnych podłoży przygotowanych z agarem tryptykazowym na bazie sojowej, zaleca się wykonanie następujących czynności: z każdej przygotowanej partii 1 lub 2 płytki lub probówki bez inokulacji należy inkubować w 37 ° C przez 24 godziny w celu wykazania ich jałowości. We wszystkich przypadkach musi pozostać bez wzrostu.

W przypadku stwierdzenia zanieczyszczenia całą partię należy wyrzucić.

Kontrola wzrostu

Do badania prawidłowego funkcjonowania agaru sojowego z tryptykazą można wykorzystać następujące szczepy bakterii: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 i Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Szczepy wysiewa się i inkubuje w warunkach tlenowych w 37 ° C przez 24 godziny.

We wszystkich przypadkach wzrost musi być zadowalający.

Można również stosować grzyby, takie jak Candida albicans Complex ATCC 10231 i Aspergillus niger ATCC 16404. Oczekuje się dobrego wzrostu obu szczepów.

Kontrola wzrostu i wzór hemolizy agaru sojowego z tryptykazą z dodatkiem krwi

Do weryfikacji prawidłowego funkcjonowania agaru z krwią przygotowanego na tej podstawie można zastosować szczepy: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 i Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Wysiewa się je i inkubuje w temperaturze 37 ° C w warunkach mikroaerofilności przez 24 godziny.

We wszystkich przypadkach wzrost powinien być zadowalający, biorąc pod uwagę, że u S. pyogenes należy obserwować beta-hemolizę (lekkie halo wokół kolonii), a hemolizę alfa (zielonkawe otoczenie wokół kolonii) należy obserwować u obu szczepów S. pneumoniae. kolonie).

Bibliografia

1. Współtwórcy Wikipedii. Trypticase Jestem agarem. Wikipedia, wolna encyklopedia. 17 grudnia 2018, 15:47 UTC. Dostępne pod adresem: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Agar sojowy Triptein. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Agar tryptozowo-sojowy. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna. Od redakcji Panamericana SA
5. BD Laboratories. Trypticase I am Agar. 2014 Dostępne pod adresem: .bd.com