AGAR VOGEL-JOHNSON: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2025

Agar Vogel-Johnsona jest stałe podłoże selektywne, a różnica kultury, opracowane specjalnie do izolacji Staphylococcus aureus. Pożywka ta została stworzona przez Vogela i Johnsona w 1960 roku na podstawie modyfikacji agaru tellurynowo-glicynowego sformułowanego w 1955 roku przez Zebovitz, Evans i Niven.

Modyfikacja polegała na zwiększeniu stężenia mannitolu obecnego w pożywce i wprowadzeniu wskaźnika pH. Obecna formuła składa się z tripteiny, ekstraktu drożdżowego, mannitolu, fosforanu dipotasowego, chlorku litu, glicyny, czerwieni fenolowej, agaru, 1% roztworu tellurynu potasu i wody.

Źródło: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Należy zauważyć, że istnieją inne podłoża, które, takie jak agar Vogel-Johnsona, są selektywne do izolacji S. aureus, takie jak agar ze słonym mannitolem i agar Baird Parker. W tym sensie można powiedzieć, że podstawą agaru Vogel-Johnsona jest mieszanina agaru ze słonym mannitolem i agarem Baird Parker.

W pierwszej rozróżnia się kolonie S. aureus poprzez fermentację mannitolu i zmianę wskaźnika pH na żółty. Z drugiej strony, w drugim przypadku S. aureus charakteryzuje się redukcją tellurynu do telluru i tworzeniem kolonii szarych do czarnych. Obie właściwości obserwuje się w agarze Vogel-Johnsona.

Podłoże to, podobnie jak jego odpowiedniki, jest przydatne do wykrywania Staphylococcus aureus w próbkach żywności, kontrolach sanitarnych produktów przemysłowych i próbkach klinicznych.

Podstawa

Dostawa składników odżywczych

Podłoże Vogel-Johnsona zawiera tripteinę i ekstrakt drożdżowy; Obie substancje dostarczają długołańcuchowych aminokwasów, które służą jako źródło węgla i azotu niezbędnych do wzrostu bakterii. Bakterie zdolne do wzrostu na tym podłożu będą pobierać składniki odżywcze z tych substancji.

Moc selektywna

Agar Vogel-Johnson jest zdolny do hamowania wzrostu bakterii Gram-ujemnych, a nawet niektórych bakterii Gram-dodatnich, sprzyjając rozwojowi gronkowców koagulazo-dodatnich. Substancje hamujące to telluryn potasu, chlorek litu i glicyna.

Moc różnicowa

Substancje, które tworzą to zróżnicowane podłoże, to mannitol i telluryn potasu. Mannitol jest węglowodanem, a podczas fermentacji powstają kwasy, które powodują, że podłoże zmienia kolor z czerwonego na żółty, co dzieje się dzięki obecności czerwonego fenolu, wskaźnika pH.

Natomiast bezbarwny telluryn po redukcji do wolnego metalicznego telluru przyjmuje kolor od ciemnoszarego do czarnego.

Staphylococcus aureus fermentuje mannitol i redukuje telluryn do telluru. Z tego powodu typowe kolonie S. aureus w tym podłożu są szare lub czarne otoczone żółtym podłożem.

Bakterie, które rosną w tej pożywce i nie redukują tellurynu ani fermentacji mannitolu, będą tworzyć przezroczyste kolonie otoczone czerwoną pożywką, nawet bardziej intensywną niż pierwotna, z powodu alkalizacji pożywki przez użycie peptonów.

Z drugiej strony bakterie, które redukują telluryn, ale nie fermentują mannitolu, będą rosły jako szare lub czarne kolonie otoczone głęboką czerwoną pożywką.

Gdyby pożywka została przygotowana bez dodatku tellurynu potasu, kolonie S. aureus rozwinęłyby się jako żółte kolonie otoczone żółtą pożywką, jak w agarze ze słonym mannitolem.

Równowaga osmotyczna i środek zestalający

Fosforan dipotasowy utrzymuje równowagę osmotyczną pożywki i dostosowuje pH do neutralności 7,2. Podczas gdy agar nadaje pożywce stałą konsystencję.

Przygotowanie

Roztwór tellurynu potasu 1% w / v

Ten roztwór nie jest zawarty w odwodnionej pożywce, ponieważ nie można go sterylizować w autoklawie. Z tego powodu jest przygotowywany oddzielnie i dodawany do już wysterylizowanego podłoża.

Niektóre domy komercyjne sprzedają gotowy do użycia 1% roztwór tellurynu potasu. Jeśli chcesz przygotować się w laboratorium, wykonaj następujące czynności:

Odważyć 1,0 g tellurynu potasu i odmierzyć 100 ml wody destylowanej. Rozpuścić telluryn potasu w części wody, a następnie dopełnić do 100 ml. Sterylizuj roztwór metodą filtracji.

Podłoże agarowe Vogel-Johnson Agar

Odważyć 60 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Mieszaninę ogrzewa się do wrzenia, aby ułatwić całkowite rozpuszczenie. Podczas procesu rozpuszczania medium jest często mieszane.

Sterylizuj w autoklawie pod ciśnieniem 15 funtów i 121 ° C przez 15 minut. Wyjąć z autoklawu i odstawić, aż podłoże osiągnie temperaturę około 45-50 ° C. Dodaj 20 ml wcześniej przygotowanego 1% roztworu tellurynu potasu.

Wymieszaj i wlej do sterylnych szalek Petriego. Pozostawić do zestalenia i zamówić odwrócone na podstawkach do talerzy, aby później przechowywać w lodówce do czasu użycia.

Końcowe pH przygotowanej pożywki powinno wynosić 7,2 ± 0,2.

Przed wysianiem próbki poczekaj, aż płytka osiągnie temperaturę pokojową.

Kolor przygotowanego podłoża jest czerwony.

Posługiwać się

Chociaż może być stosowany do izolacji S. aureus w każdym typie próbek, jest używany głównie do analizy mikrobiologicznej produktów farmaceutycznych, kosmetyków i żywności.

Zaleca się, aby inokulum było gęste. Siew można wykonać przez nacięcie platynową rączką lub powierzchnię szpatułką Drigalskiego.

Płytki inkubuje się w 35-37 ° C przez 24 do 48 godzin aerobiozy.

QA

Następujące szczepy kontrolne mogą być używane do przeprowadzania kontroli jakości na pożywce Vogel-Johnsona:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 lub Proteus mirabilis ATCC 43071.

Oczekiwany wynik jest następujący: dla szczepów S. aureus wzrost jest zadowalający z czarnymi koloniami otoczonymi żółtą pożywką. W przypadku S. epidermidis regularny wzrost z przezroczystymi lub czarnymi koloniami otoczonymi czerwoną pożywką.

Podobnie, oczekuje się całkowitego zahamowania dla E. coli i częściowego lub całkowitego zahamowania dla Proteus mirabilis; jeśli rośnie, będzie to robić oszczędnie, a kolonie będą czarne i otoczone czerwonym kolorem.

Bibliografia

1. BD Laboratories. VJ (Vogel and Johnson Agar). 2006. Dostępne na: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel-Johnson Agar. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Telluryn potasu. 2015 Dostępne pod adresem: britania.com
4. Laboratorium Himedia. Podłoże Vogel-Johnson Agar Medium. Dostępne pod adresem: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel-Johnson Agar Base. Podręcznik mikrobiologii firmy Merck. Wydanie 12, str. 502-503. Dostępne pod adresem: Users / Team / Downloads
6. Współtwórcy Wikipédii, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia a encyclopaedia free, dostępna pod adresem: wikipedia.org.
7. Venezuelan Standard Covenin 1292-89. (1989). Żywność. Izolacja i wyliczenie Staphylococcus aureus. Dostępne pod adresem: sencamer.gob.ve