WODA PEPTONOWA: UZASADNIENIE, PRZYGOTOWANIE I ZASTOSOWANIA - BIOLOGIA - 2026

Wody peptonu to ciekłe środowisko wzbogacania, nieselektywne, głównie jako rozcieńczalnika próbki żywności lub innych materiałów. Pożywka ta z chemicznego punktu widzenia jest bardzo prosta, zawiera pepton mięsny, chlorek sodu i wodę.

Posiada określoną wartość odżywczą, pozwalającą na wzbogacenie próbki. Jeśli istnieją nadużywane bakterie, to podłoże ma moc naprawy żywotności. Jest szczególnie przydatny w regeneracji bakterii z rodziny Enterobacteriaceae.

Woda peptonowa w butelkach. Źródło: mgr inż. Marielsa gil

W przypadku odzyskiwania salmonelli zaleca się użycie wariantu wody z peptonem z bufetem; Służy jako pożywka do wstępnego wzbogacania próbki, w tym przypadku zawiera inne pierwiastki, takie jak fosforan disodu i fosforan dipotasowy.

Zwykle woda peptonowa jest przygotowywana przy obojętnym pH, jednak istnieją inne warianty, w których konieczne jest, aby pH wynosiło 8,5 ± 0,2 (zasadowe), ponieważ izolowane bakterie są alkalifilowe, takie jak Vibrio cholerae.

Ponadto pożywkę tę można stosować jako podłoże podstawowe do testów fermentacji węglowodanów.

Podstawa

Peptony dostarczają składników odżywczych niezbędnych do rozwoju bakterii, zwłaszcza azotu i krótkołańcuchowych aminokwasów, a chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną.

Ponadto podłoże umożliwia rozproszenie, homogenizację i naprawę komórek bakteryjnych uszkodzonych w procesach przemysłowych.

Jako rozcieńczalnik jest idealny, skutecznie zastępując roztwór fizjologiczny (SSF) lub roztwór buforu fosforanowego (PBS).

Wzrost bakterii jest widoczny obserwując jego zmętnienie.

Przygotowanie

Przygotowanie domowe (niekomercyjne)

Odważyć 1 g peptonu i 8,5 g chlorku sodu, rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. PH należy ustawić na 7,0. W tym celu można użyć 1N chlorku sodu.

Przygotowanie na pożywce handlowej

Odważyć 15 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w litrze wody destylowanej. Homogenizuj mieszaninę. Jeśli to konieczne, mieszaninę gotuje się przez 1 minutę, aby pomóc w całkowitym rozpuszczeniu. W razie potrzeby podawać w butelkach o pojemności 100 ml lub probówkach 10 ml. Autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut.

Ostudzić i używać lub przechowywać w lodówce. Końcowe pH pożywki wynosi 7,2 ± 0,2.

Odwodnione podłoże ma kolor jasnobeżowy, a przygotowane podłoże jest jasno bursztynowe.

Przygotowanie do testów fermentacyjnych

Do poprzedniego przygotowania - przed sterylizacją - należy dodać węglowodany do końcowego stężenia 1% plus wskaźnik andrade (kwaśna fuksyna) lub czerwień fenolowa (0,018 g / l). Rurki powinny być wyposażone w dzwonek Durham, aby obserwować tworzenie się gazu.

Inne warianty wody peptonowej

Buforowana lub zbuforowana woda peptonowa

Zawiera enzymatyczny hydrolizat kazeiny, chlorek sodu, diwodorofosforan potasu i dodekahydrat wodorofosforanu sodu. Końcowe pH wynosi 7,0 ± 0,2.

W celu przygotowania odważ 20 g odwodnionej pożywki i rozpuść w 1 litrze wody destylowanej. Odstaw na około 5 minut. Podgrzewaj przez 1 minutę, aż do całkowitego rozpuszczenia.

W razie potrzeby przelać do odpowiednich słoików. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

-Woda z peptonem alkalicznym

Odważyć 25 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody. Postępuj jak opisano powyżej. PH waha się od 8,3 do 8,7.

Posługiwać się

Inokulum wykonuje się przez bezpośrednie umieszczenie próbki.

Służy do rozcieńczania próbek, zwłaszcza gdy istnieje podejrzenie, że mogą wystąpić uszkodzone bakterie. Zwykle rozcieńczenia wynoszą 1:10 i 1: 100.

Inkubować przez 24 godziny w aerobiozie w temperaturze 35-37 ° C.

Próbki kału

W przypadku próbek kału poszukujących Salmonelli zaleca się użycie wody zbuforowanej lub zbuforowanej jako podłoża do wstępnego wzbogacenia.

Aby to zrobić, wykonaj następujące czynności:

Jeśli utworzy się stolec, pobierz 1 g próbki. Jeśli są płynne, weź 1 ml kału i zawieś w probówce z 10 ml polewanej wody peptonowej. W przypadku wymazów z odbytu, należy przenieść materiał zawarty w wymazówce do probówki ze zbuforowaną wodą peptonową.

We wszystkich przypadkach próbkę należy bardzo dobrze wymieszać i zhomogenizować.

Inkubować w 37 ° C przez 18 do 24 godzin. Następnie posiew w bulionie wzbogacającym, takim jak bulion seleninowo-cystynowy lub bulion tetrationianowy w 37 ° C przez 18-24 godzin dłużej. Wreszcie, uprawiaj na podłożach selektywnych dla Salmonelli, takich jak między innymi agar SS, agar XLD, agar Hektoen.

Próbki żywności

Woda peptonowa jest używana jako pożywka do wzbogacania lub jako prosty rozcieńczalnik, ale jeśli poszukuje się gatunku Salmonella, jest używana jako pożywka do wstępnego wzbogacania, jak już opisano.

W przypadku jedzenia postępuj w następujący sposób:

W przypadku pokarmów stałych odważyć 25 g próbki, a dla płynnych odmierzyć 25 ml. Umieścić tę porcję w kolbach zawierających 225 ml wody peptonowej. Wymieszaj i zhomogenizuj próbkę.

Jeśli podejrzewa się, że ładunek drobnoustrojów jest wysoki, można przeprowadzić seryjne lub dziesiętne rozcieńczenia, aby ułatwić zliczanie jednostek tworzących kolonie (CFU).

Liczba rozcieńczeń zależy od rodzaju próbki i doświadczenia analityka.

Jeśli natomiast podejrzewa się, że ładunek drobnoustrojów jest bardzo niski, nie ma potrzeby wykonywania rozcieńczeń. Następnie subkultura na podłożach selektywnych.

W przypadku pokarmów z morza, takich jak skorupiaki, ryby m.in. w poszukiwaniu Vibrio cholerae lub innych gatunków Vibrio, należy stosować wodę peptonową o pH 8,5 (alkaliczna woda peptonowa).

QA

Z każdej przygotowanej partii jedną do dwóch probówek należy inkubować bez inokulacji przez 24 godziny w aerobiozie w 37 ° C. Pod koniec czasu nie należy obserwować zmętnienia ani zmiany koloru.

Do oceny ich skuteczności można również wykorzystać znane szczepy kontrolne:

W tym celu można zastosować następujące szczepy bakterii: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego rozwoju drobnoustrojów, na co wskazuje zmętnienie podłoża.

Ograniczenia

-Odwodnione podłoże jest bardzo higroskopijne, dlatego należy je chronić przed wilgocią.

-Nie należy używać podłoża, jeśli zaobserwuje się jakikolwiek rodzaj zepsucia.

- Odwodnioną pożywkę hodowlaną należy przechowywać w temperaturze od 10 do 35 ° C

- Przygotowaną pożywkę należy przechowywać w lodówce (2-8 ° C).

Bibliografia

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. Techniques for Microbiological Analysis of Foods. 2009, wyd. Wydział Chemii UNAM. Meksyk. Wersja dla Administratora Podręczników i Dokumentów (AMyD) Wydziału Chemii UNAM 1. Dostępna pod adresem: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Bufetowana woda peptonowa. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Woda peptonowa. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Woda peptonowa. 2015 Dostępne pod adresem: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Buforowana woda peptonowa. Dostępne pod adresem: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkaliczna woda peptonowa. Dostępne pod adresem: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana SA Argentina.