BŁĘKIT LAKTOFENOLOWY: CHARAKTERYSTYKA, SKŁAD, PREPARAT, ZASTOSOWANIA - CHEMIA - 2026

Laktofenol niebieski lub niebiesko bawełna wytwarza się właściwości pojedynczych barwników. Jest używany w laboratoriach klinicznych głównie do barwienia struktur grzybowych, takich jak strzępki, rurki zarodkowe i zarodniki.

Pomaga w przypuszczalnej lub wstępnej diagnostyce niektórych grzybów, jednak zawsze wskazane jest wzmocnienie diagnozy bardziej szczegółowymi testami, takimi jak testy biochemiczne lub serologiczne.

Graficzne przedstawienie wybarwienia błękitem laktofenolowym, rozmaz wybarwiony błękitem laktofenolowym, preparat montowany w mikroskopie. Źródło: public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8

Błękit laktofenolowy składa się z kwasu mlekowego, błękitu anilinowego, gliceryny, fenolu i wody dejonizowanej. Można go przygotować w laboratorium lub kupić w postaci gotowej do użycia. Po przygotowaniu jest gotowy do użycia, pod żadnym pozorem nie należy go rozcieńczać, ponieważ to działanie da straszne rezultaty.

Stężenie jego składników sprawia, że ​​idealnie nadaje się do barwienia struktur grzybowych, gdyż fenol eliminuje towarzyszącą mu mikrobiotę bakteryjną, a kwas mlekowy tworzy film ochronny wokół struktury grzyba. Wreszcie błękit anilinowy ma powinowactwo do przylegania do struktur grzyba.

Podstawa

W przypadku błękitu laktofenolowego przeprowadza się proste barwienie struktur grzybowych określonej kultury mykologicznej. Nazywa się to prostym, ponieważ używa tylko jednego barwnika.

Błękit laktofenolowy oprócz barwienia działa również odstraszająco na próbkę, dzięki łącznemu działaniu kwasu mlekowego i fenolu dodatkowo fenol zachowuje się jak zaprawa i jednocześnie zapobiega lizie drobnoustroju poprzez hamowanie enzymów hydrolitycznych, które może być obecny.

Kwas mlekowy zachowuje natomiast morfologię struktur grzyba.

Z drugiej strony, błękit anilinowy ma właściwość przylegania lub wiązania się ze strukturami zawierającymi chitynę. Struktury są barwione na jasnoniebiesko.

Należy zaznaczyć, że ściana komórkowa mikroorganizmów grzybowych, zwłaszcza pleśni, zawiera chitynę, dlatego barwnik ten jest idealny do barwienia tych mikroorganizmów.

cechy

Roztwór błękitu laktofenolowego jest silnie kwaśnym, lekko mętnym wodnym barwnikiem o jasnoniebieskim kolorze. Zachowuje stabilność, jeśli jest przechowywany w temperaturze od 15 ° C do 25 ° C. Butelka musi być dobrze zamknięta. Działa drażniąco i żrąco na skórę i błony śluzowe.

Kompozycja

Formuła przygotowania jednego litra błękitu laktofenolowego jest następująca:

-250 g / l kwasu mlekowego

-1,0 g / l błękitu anilinowego lub błękitu metylowego

-500 g / l gliceryny

-250 g / l fenolu

-250 ml wody dejonizowanej lub destylowanej.

Fenol rozpuszcza się we wcześniej ogrzanej wodzie. Kwas mlekowy i gliceryna są dodawane i bardzo dobrze mieszane. W końcu błękit anilinowy rozpuszcza się. Ponownie miesza się i jest gotowy do użycia.

Porcje potrzebne do przygotowania 80 ml roztworu błękitu laktofenolowego to:

-20 g kryształów fenolu

-20 ml kwasu mlekowego

-40 ml gliceryny lub glicerolu

-20 ml wody destylowanej.

Posługiwać się

Służy do barwienia struktur grzybowych i, dzięki cechom morfologicznym obserwowanym na poziomie mikroskopowym, do postawienia przypuszczalnej diagnozy grzyba.

Proces

Barwienie struktur grzybowych kultur

- Weź czystą kulturę grzyba, którego struktury mają być obserwowane.

- Najlepiej pracować w okapie z przepływem laminarnym lub pod zapalniczką, używając maski i rękawic, ponieważ konieczne jest przestrzeganie norm bezpieczeństwa biologicznego, ponieważ większość pleśni jest łatwa do rozprzestrzeniania się w środowisku i dlatego stanowi zagrożenie dla operatora.

- Na szkiełku umieszcza się kroplę błękitu laktofenolowego.

- Wytnij mały kwadrat dobrej jakości taśmy klejącej i bardzo ostrożnie przyklej go do końca wysterylizowanej na zimno platynowej rączki.

- Platynowy uchwyt zbliża się do najbardziej powierzchownej części kolonii grzybów i bardzo ostrożnie dotyka kultury, dokładnie tam, gdzie znajduje się taśma klejąca.

- Następnie przenosi się go na szkiełko i nakłada bezpośrednio na kroplę błękitu laktofenolowego, dbając o to, aby taśma była idealnie rozciągnięta i nasmarowana barwnikiem. Platynowy uchwyt jest bardzo delikatnie usuwany.

- Kolejną kroplę błękitu laktofenolowego umieszcza się na taśmie i na wierzchu szkiełka nakrywkowego. Nie wywieraj zbyt dużego nacisku, aby nie zniszczyć struktur grzyba, ponieważ są one wyjątkowo delikatne. Barwnik powinien działać przez około 3 do 4 minut.

- Po tym czasie preparat jest gotowy do obserwacji pod mikroskopem w powiększeniu 10X lub 40X. Jeśli wymagana jest obserwacja 100X, należy użyć olejku immersyjnego.

- Struktury grzyba są na ogół zabarwione na niebiesko, z wyjątkiem grzybów dematiaceous, które zachowają swój charakterystyczny brązowy kolor dla tego rodzaju grzybów.

Bezpośrednie barwienie próbek biologicznych

Jeśli wymagane jest badanie bezpośredniej próbki biologicznej, takiej jak między innymi plwocina, ropa, wysięki, wydzieliny, te muszą mieć wcześniejszą procedurę odkażania próbki. W tym celu stosuje się roztwór NaOH.

W przypadku próbek włosów można je farbować bezpośrednio.

Kilka dotkniętych włosów (w sumie 10) pobiera się z przypuszczalnych zmian grzybiczych skóry owłosionej głowy (obszary łysienia) i umieszcza na szkiełku (3 do 4 włosów na szkiełko). Kilka kropli błękitu laktofenolowego umieszcza się na wierzchu i natychmiast przykrywa szkiełkiem nakrywkowym.

Chwyć szkiełko kleszczykami i delikatnie podgrzej nad palnikiem. Aby to zrobić, wykonaj 3 do 4 szybkich przejść przez płomień. Obserwuj mikroskop pod kątem 40X i szukaj zarodników na zewnątrz lub wewnątrz włosa (odpowiednio ectothrix lub endothrix). W razie potrzeby dolej olejku immersyjnego i obserwuj przy 100X.

Zabarwienie probówki zarodkowej w identyfikacji

Po inkubacji przypuszczalnej hodowli Candida albicans w ludzkiej surowicy przez 2 do 4 godzin w 37 ° C, część roztworu jest pobierana i barwiona błękitem laktofenolowym. Preparat obserwuje się pod mikroskopem przy 40X. Rurka zarodkowa jest obecna, a blastospory barwią się na jasnoniebiesko.

Karta charakterystyki laktofenolu

Krajowe Stowarzyszenie Ochrony Przeciwpożarowej (NFPA) ustanawia kartę charakterystyki substancji chemicznych pod względem ryzyka, jakie ona reprezentuje w różnych aspektach, które są symbolizowane przez kolorowy romb i liczbę od 0 do Cztery.

Zagrożenia dla zdrowia zaznaczono kolorem niebieskim, palność kolorem czerwonym, niestabilność lub reaktywność kolorem żółtym, a każde szczególne zagrożenie kolorem białym.

Zdrowie

Zagrożenie dla zdrowia, jakie stwarza błękit laktofenolowy, zgodnie z NFPA, wynosi 3. Oznacza to, że substancja jest wyjątkowo niebezpieczna w przypadku spożycia lub bezpośredniego kontaktu ze skórą lub błonami śluzowymi.

Jest to substancja silnie żrąca i drażniąca.

W kontakcie ze skórą i błonami śluzowymi powoduje poważne oparzenia.

W przypadku spożycia może powodować ból głowy, dezorientację, senność, utratę przytomności, zatrzymanie oddechu, a nawet śmierć.

Zapalność

Zgodnie z NFPA błękit laktofenolowy ma poziom palności na poziomie 1. Oznacza to, że pali się tylko wtedy, gdy zostanie podgrzany powyżej 94 ° C.

Niestabilność

Wymieniony zgodnie z NFPA na poziomie 0 (zero) pod względem reaktywności. Oznacza to, że nie ma ryzyka reaktywności, czyli jest substancją stabilną chemicznie.

Zagrożenia szczególne

Nie stwarza żadnych dodatkowych specjalnych zagrożeń.

Bibliografia

1. Laboratorium SAR. Błękit laktofenolowy. 2010. Dostępne pod adresem: labsar.com.
2. Laboratorium chemii klinicznej stosowanej. Błękit laktofenolowy. 2015 Dostępne pod adresem: cromakit.es
3. Merck Laboratories. Mikroskopia błękitu laktofenolowego w roztworze. Dostępne pod adresem: Users / Equipo / Downloads
4. Karta awaryjna. Błękit laktofenolowy, roztwór do barwienia grzybów. Universidad Pontificia Javeriana, Bogotá Colombia. 2014 Dostępne pod adresem: javeriana.edu.co
5. González M, Diamont D, Gutiérrez B. Technika barwienia struktur grzybowych barwnikami roślinnymi jako niezanieczyszczająca alternatywa. Bioagro, 2011; 23 (1): 65–68. Dostępne pod adresem: Redalyc.
6. Laboratorium Himedia. Bawełna z laktofenolem w kolorze niebieskim. 2017. Dostępne na: himedialabs.com
7. Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, Actor J, Dasgupta A. Testy biochemiczne i techniki barwienia dla identyfikacji drobnoustrojów. Science Direct, 2017; 61-73. Dostępne w: Elsevier