BACILLOSCOPY: PROCEDURA, DO CZEGO SŁUŻY I RODZAJE - MEDYCYNA - 2026

Rozmaz to narzędzie diagnostyczne dla aktywnej gruźlicy płucnej. Jest to technika laboratoryjna umożliwiająca wykrywanie i pomiar prątków kwasoopornych, takich jak Mycobacterium tuberculosis. Jest to najczęściej stosowana na świecie metoda diagnozowania czynnej gruźlicy płuc w społeczności i oceny korzyści wynikających z leczenia.

Gruźlica płuc jest chorobą zakaźną wywoływaną przez Mycobacterium tuberculosis, która infekuje płuca, ale może wpływać na inne narządy i układy. Na całym świecie ponad 6 milionów ludzi cierpi na gruźlicę płuc (TB).

Komórki M. tuberculosis w rozmazie plwociny (źródło: Microrao / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0) przez Wikimedia Commons)

Mycobacterium tuberculosis i inne niegruźlicze gatunki Mycobacterium posiadają na ścianie komórkowej bogatą w kwas mykolowy powłokę lipidową, która jest odporna na przebarwienia kwaśne i alkoholowe po barwieniu barwnikami zasadowymi.

Dlatego stosuje się specjalne metody barwienia, takie jak metoda Ziehla-Neelsena. Te proste i niedrogie metody pozwalają zachować plamę na ścianie, gdy próbka jest spłukiwana roztworem kwasu, a ściana Mycobacterium zmienia kolor na czerwony w przeciwieństwie do innych bakterii, które wybarwiają się na niebiesko.

Aby wykonać rozmaz mikroskopowy, wymagana jest próbka plwociny, najlepiej rano, po wstaniu z łóżka. Można również użyć próbek tkanek lub próbek płynów ustrojowych.

Proces

Próbki, które mają być przetwarzane do mikroskopii rozmazu, to próbki plwociny, próbki tkanek lub próbki płynów ustrojowych. Próbki tkanek można pobrać za pomocą bronchoskopii lub biopsji węzłów chłonnych lub innych tkanek.

Ponieważ gruźlica może wpływać na każdy narząd lub układ, próbki mogą być bardzo zróżnicowane, w tym: próbki moczu, płyn mózgowo-rdzeniowy, płyn opłucnowy, płyn puchlinowy, krew, ropa z otwartych jam, biopsje itp.

Próbki zmian pozapłucnych również należy poddać obróbce do hodowli. Próbki plwociny pobierane są w godzinach porannych po wzroście.

Można pobrać kilka próbek z rzędu lub w kolejnych dniach. Próbki należy etykietować w zamkniętych butelkach z szeroką szyjką. Powinny zawierać dane pacjenta, rodzaj próbki i datę pobrania próbki.

Procedura techniczna

- Po uzyskaniu próbki można ją odwirować w celu zatężenia lub użyć bezpośrednio. Początkowa procedura polega na umieszczeniu kilku kropli próbki i rozprowadzeniu ich na szkiełku.

- Próbka jest pokryta przefiltrowaną fuksyną (roztworem barwiącym).

- Następnie jest podgrzewany do uzyskania około trzech emisji białawych oparów.

- Poczekaj pięć minut, aż próbka ostygnie i przemyj ją wodą.

- Jest pokryty roztworem wybielającym (kwaśnym alkoholem) na okres 2 minut.

- Jest ponownie myty wodą.

- Próbkę przykrywa się błękitem metylenowym i odstawia na jedną minutę.

- Zmywa się wodą.

- Pozostaw do wyschnięcia na powietrzu i przejdź do obserwacji pod mikroskopem.

Zdjęcie z mikroskopu (zdjęcie: Konstantin Kolosov na www.pixabay.com)

Ta procedura jest szybka, prosta, niedroga i umożliwia komórkom Mycobacterium tuberculosis zabarwienie na czerwono. Ta technika nosi nazwę techniki barwienia Ziehl-Neelsen.

Obserwacja mikroskopowa polega na identyfikacji obecności prątków kwasoopornych i ich kwantyfikacji na podstawie pola.

Komórki Mycobacterium tuberculosis wyglądają jak czerwone, ziarniste, zakrzywione pręciki na niebieskim tle. Mogą być izolowane, parowane lub grupowane. Obserwację należy prowadzić w terenie, a dla każdego rozmazu należy zbadać co najmniej 100 pól.

Wynik uważa się za pozytywny, gdy w każdym polu jest więcej niż 10 komórek M. tuberculosis. Odpowiada to 5000 do 100 000 pałeczek na każdy mililitr próbki.

W takich przypadkach jest uważany za pozytywny dla Mycobacterium tuberculosis, ponieważ niegruźlicze Mycobacterium lub inne bakterie odporne na kwasy mają różne formy i ogólnie obserwowana ilość na pole jest mniejsza niż 10.

Osoba badająca próbkę musi mieć doświadczenie lub wiedzę fachową w wykrywaniu i rozpoznawaniu tych mikroorganizmów, ponieważ wyniki mogą zawierać fałszywie negatywne lub fałszywie pozytywne wyniki.

Istnieją inne techniki fluoroskopowe, które są bardziej czułe, ale znacznie droższe. Jedna z takich technik wykorzystuje barwienie Auramine-O w celu uzyskania zielonej fluorescencji lub barwienie Auramine O / Rhodamine B w celu zaobserwowania żółto-pomarańczowej fluorescencji.

Pozytywne przypadki są na ogół wykonywane w celu posiewu i antybiogramu w celu potwierdzenia diagnozy i odpowiedniego doboru leczenia.

Do czego służy mikroskopia rozmazowa?

Gruźlica jest chorobą zakaźną, która atakuje płuca oraz inne narządy i układy narządów organizmu. Jest to choroba zakaźna powodująca poważne urazy układu oddechowego, które w przypadku niewłaściwego leczenia mogą spowodować śmierć pacjenta.

Gruźlica przenoszona jest prawie wyłącznie przez zawieszone w powietrzu kropelki z odkrztuszania pacjenta zakażonego gruźlicą płuc. Te małe kropelki mogą pozostać w powietrzu i mogą zarazić osobę, która je wdycha.

Komórki M. tuberculosis (źródło: NIAID / CC BY (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0) via Wikimedia Commons)

Zakażenie wymaga dłuższego kontaktu z zakażonym pacjentem, który nieustannie pluje pałeczkami w słabo wentylowanym środowisku. Osoby z niedoborami odporności są bardziej narażone na zakażenie.

Pacjenci zakażeni wirusem HIV są bardziej niż reszta populacji narażeni na poważne infekcje dróg oddechowych, w tym gruźlicę płuc. Stąd znaczenie mikroskopii wymazowej jako szybkiej i niedrogiej metody diagnostycznej gruźlicy.

Badanie mikroskopowe wymazu pozwala na postawienie bakteriologicznej diagnozy gruźlicy, jednak pozytywny wynik należy potwierdzić innymi badaniami.

Badania potwierdzające rozpoznanie gruźlicy obejmują badania radiologiczne, które pokazują charakterystyczne obrazy w górnych płatach płuc, dodatnie wyniki testów tuberkulinowych i dodatnie posiewy próbek.

Rozmaz negatywny

Mikroskopia z rozmazem ujemnym niekoniecznie wyklucza rozpoznanie gruźlicy, ponieważ eliminacja prątków nie jest stała, zwłaszcza gdy próbka jest plwociną. Dlatego w tych przypadkach, gdy podejrzewa się diagnozę, konieczne są próbki seryjne.

Pozytywny rozmaz

Dodatni wynik badania mikroskopowego wymazu wskazuje na gruźlicę i musi zostać potwierdzony innymi badaniami uzupełniającymi. Zawsze, gdy wynik jest pozytywny, należy wykonać posiew i antybiogram.

Po ustaleniu leczenia, utrzymujące się obniżanie dodatniej skali rozmazu mikroskopowego do uzyskania wyniku negatywnego, pozwala kontrolować korzyści z zabiegu.

Bibliografia

1. Aziz, MA (2002). Zewnętrzna ocena jakości mikroskopii rozmazowej AFB.
2. Desikan, P. (2013). Mikroskopia rozmazu plwociny w gruźlicy: czy jest nadal aktualna? Indyjski dziennik badań medycznych, 137 (3), 442.
3. Fauci, AS, Kasper, DL, Hauser, SL, Jameson, JL i Loscalzo, J. (2012). Zasady medycyny wewnętrznej Harrisona (tom 2012). DL Longo (red.). Nowy Jork: Mcgraw-hill.
4. Ngabonziza, JCS, Ssengooba, W., Mutua, F., Torrea, G., Dushime, A., Gasana, M.,… & Muvunyi, CM (2016). Diagnostyczna wydajność mikroskopii rozmazu i przyrostowa wydajność Xpert w wykrywaniu gruźlicy płuc w Rwandzie. Choroby zakaźne BMC, 16 (1), 660.
5. Sardiñas, M., García, G., Rosarys, MM, Díaz, R. i Mederos, LM (2016). Znaczenie kontroli jakości bacilloskopii w laboratoriach zajmujących się diagnostyką gruźlicy. Chilean Journal of Infectology: Official Organ of the Chilean Society of Infectology, 33 (3), 282-286.
6. Sequeira de Latini, MD i Barrera, L. (2008). Podręcznik diagnostyki bakteriologicznej gruźlicy: normy i przewodnik techniczny: część 1 - mikroskopia wymazowa. W Podręczniku do bakteriologicznej diagnozy gruźlicy: normy i przewodnik techniczny: część 1 - rozmaz mikroskopowy (str. 64-64).