CLED AGAR: UZASADNIENIE, ZASTOSOWANIA I PRZYGOTOWANIE - BIOLOGIA - 2025

CLED Agar (Cystyna-laktozy elektrolitu niedoborem) jest stały różnica podłoże hodowlane stosowane do diagnozowania zakażenia dróg moczowych. Skład pożywki hodowlanej zapewnia dobry wzrost patogenów układu moczowego i jest idealny do ilościowego oznaczania jednostek tworzących kolonie (CFU).

Pożywka CLED jest nieselektywna, ponieważ mogą w niej rosnąć mikroorganizmy Gram-ujemne i Gram-dodatnie. Ale to nie jest problem, ponieważ większość ZUM jest wywoływana przez tylko jeden rodzaj mikroorganizmu.

Agar CLED

W przypadku infekcji wywołanych przez wiele drobnoustrojów można uzyskać 2 lub 3 różne bakterie, ale jest to bardzo rzadkie i najczęściej są to próbki skażone.

Wśród bakterii Gram-ujemnych, które mogą rosnąć w tym podłożu, są pałeczki należące do rodziny Enterobacteriaceae i inne pałeczki jelitowe, wśród których najczęściej izolowanymi w moczu są uropatogeny: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Między innymi Pseudomonas aeruginosa.

Podobnie, wśród bakterii Gram-dodatnich, które mogą rosnąć w tym podłożu, mogą rosnąć Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp, a nawet drożdżaki, takie jak kompleks Candida albicans.

Jednak ze względu na skład chemiczny pożywki nie pozwala na wzrost niektórych wymagających patogenów układu moczowo-płciowego, takich jak między innymi Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis.

Uzasadnienie CLED Agar

Pożywka CLED zawiera jako źródło energii ekstrakt z mięsa, trzustkowy hydrolizat kazeiny i hydrolizat żelatyny. Dostarczają składników odżywczych dla rozwoju niewymagających bakterii.

Zawiera również cystynę, aminokwas umożliwiający wzrost bakterii z grupy coli, wyróżniających się niewielkim rozmiarem.

Podobnie, zawiera laktozę jako węglowodan ulegający fermentacji, z tego powodu ta pożywka jest zróżnicowana; możliwość odróżnienia bakterii fermentujących od fermentujących bez laktozy.

Bakterie fermentujące powodują zmianę pH pożywki na skutek produkcji kwasów, tworząc żółte kolonie, natomiast bakterie niefermentujące nie generują zmian w pożywce, przez co przyjmują kolor pierwotnego agaru, zielony.

Reakcja fermentacji ujawnia się dzięki obecności wskaźnika pH, którym w tym podłożu jest błękit bromotymolowy.

Z drugiej strony niskie stężenie elektrolitów w pożywce hamuje typowy inwazyjny wzrost z rodzaju Proteus, zwany efektem roju. Daje to przewagę nad innymi pożywkami, ponieważ pozwala zliczać CFU, w tym jeśli występuje rodzaj Proteus.

Jednak niskie stężenie elektrolitów hamuje wzrost niektórych gatunków z rodzaju Shigella, co jest niekorzystne w porównaniu z innymi pożywkami.

Uzasadnienie dla agaru CLED (Bevis)

Istnieje odmiana lub modyfikacja tego podłoża wykonana przez Bevisa, który włączył kwaśną fuksynę (wskaźnik Andrade'a) do oryginalnej kompozycji. Działa w połączeniu z błękitem bromotymolowym, aby odróżnić bakterie fermentacyjne od niefermentujących.

Różnica między pożywką konwencjonalną a zmodyfikowaną polega na zabarwieniu kolonii. W przypadku bakterii fermentujących laktozę kolonie nabierają czerwonawo-pomarańczowego koloru z różową lub czerwoną obwódką, podczas gdy kolonie niefermentujące są niebieskawo-szare.

Aplikacje

Agar CLED służy wyłącznie do wysiewu próbek moczu. Stosowanie tego medium jest szczególnie częste w laboratoriach europejskich, podczas gdy w Ameryce jest ono rzadziej używane.

Pobranie próbki musi spełniać określone parametry, aby uzyskać wiarygodne wyniki, w tym:

• Nie przyjmować antybiotyków przed pobraniem próbek.
• Najlepiej jest pobierać mocz rano, gdyż jest on bardziej skoncentrowany, gdy nie jest możliwe pobranie próbki metodami inwazyjnymi.
• Przed pobraniem próbki dokładnie umyj genitalia.
• Odrzuć pierwszy strumień moczu, a następnie umieść pojemnik.
• Zbierz od 25 do 30 ml moczu do dobrze oznakowanego sterylnego pojemnika.
• Zabierz natychmiast do laboratorium otoczonego lodem.
• Należy go przetworzyć w ciągu 2 godzin od wydania lub przechowywać w lodówce w temperaturze 4 ° C maksymalnie przez 24 godziny.

Wysiewanie próbek moczu

Próbkę moczu należy rozcieńczyć w stosunku 1:50.

W celu rozcieńczenia należy umieścić 0,5 ml moczu pacjenta i rozcieńczyć 24,5 ml sterylnego roztworu fizjologicznego.

Odmierzyć 0,1 ml rozcieńczonego moczu i rozprowadzić szpatułką drigalskiego na pożywce CLED. Jest to najlepsza metoda wysiewu do liczenia kolonii. Z tego powodu jest stosowany w próbkach moczu, ponieważ wyniki muszą być wyrażone w CFU / ml.

Aby określić ilościowo uzyskane kolonie, wykonaj następujące czynności: policz kolonie na płytce i pomnóż je przez 10, a następnie przez 50. To daje ilość CFU / ml moczu.

Interpretacja

Liczy powyżej 100 000 CFU / ml -– Wskazuje na zakażenie dróg moczowych

Liczy poniżej 1000 CFU / ml-– Brak infekcji

Liczy między 1000–10 000 CFU / ml –– Wątpliwe, możliwe zanieczyszczenie, powtórz próbkowanie.

ID

Kolonie wyhodowane na agarze CLED powinny mieć Grama i zależnie od cech morfotorycznych mikroorganizmu przeprowadza się pewną subkulturę.

Na przykład, jeśli jest to pałeczka Gram-ujemna, zostanie wysiana na agarze MacConkey, gdzie potwierdzona jest fermentacja laktozy lub jej brak. Dodatkowo dołączany jest agar odżywczy w celu wykonania testu oksydazy.

Jeśli Gram ujawni ziarniaki Gram-dodatnie, można je wyhodować na agarze ze słonym mannitolem i agarze odżywczym. W tym drugim przypadku przeprowadza się test katalazy. Wreszcie, jeśli zaobserwuje się drożdże, zostaną wysiane na agarze Sabouraud.

Wiele laboratoriów unika stosowania pożywki CLED i woli używać tylko agaru z krwią, agaru MacConkey i agaru odżywczego do wysiewu próbek moczu.

Przygotowanie

W kolbie z 1 litrem wody destylowanej rozpuść 36,2 g proszku agarowego CLED. Po 5 minutach odstawienia podgrzać ponownie zawieszony agar, stale mieszając do wrzenia przez 1 minutę.

Następnie sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Pod koniec czasu wyjmuje się go z autoklawu i pozostawia do ostygnięcia do temperatury 45 ° C. Następnie do każdej sterylnej szalki Petriego podaje się 15-20 ml.

Procedura serwowania talerzy musi być wykonywana wewnątrz okapu z przepływem laminarnym lub przed palnikiem Bunsena, aby uniknąć zanieczyszczenia.

Serwowane talerze pozostawia się do zestalenia, układa w odwróconym stojaku i przechowuje w lodówce (2-8 ° C) do czasu użycia.

Końcowe pH przygotowanej pożywki powinno wynosić 7,3 ± 0,2.

Bibliografia

1. Zalecenia dotyczące diagnostyki mikrobiologicznej infekcji dróg moczowych. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57–63. Dostępne pod adresem: scielo.org.
2. Panchi J. Identyfikacja czynnika drobnoustrojowego wywołującego infekcje dróg moczowych u pacjentów poddawanych cewnikowaniu pęcherza. 2016. Praca licencjacka uprawniająca do uzyskania tytułu licencjata w Laboratorium Klinicznym. Politechnika Ambato. Ekwador.
3. Britannia Laboratories. Podłoże CLED. Dostępne na: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Instrukcja użycia, CLED Agar. 2013 Dostępne pod adresem: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Podstawowy podręcznik mikrobiologii. Dostępne pod adresem: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Opcja agaru CLED w rutynowych posiewach moczu. Ocena prospektywna i porównawcza. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Serwis Publikacji UCA.